PI3K-AKT信號傳導通路對鼻咽癌侵襲和轉(zhuǎn)移影響的初步研究.pdf

1、【目的】 研究PI3K/AKT 信號傳導通路對鼻咽癌活檢標本及鼻咽癌細胞系亞克隆株CNE-2Z-H5侵襲、轉(zhuǎn)移的影響及其可能的機制。通過觀察PI3K/AKT信號傳導通路特異性抑制劑LY294002對人低分化鼻咽癌細胞系亞克隆株 CNE-2Z-H5侵襲、轉(zhuǎn)移的影響及該通路在 CNE-2Z-H5 和人低分化鼻咽癌細胞系母系CNE-2Z 中表達的對比，初步探討PI3K/AKT 信號傳導通路在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用和阻滯該通路在鼻咽癌治療中

2、可能的潛在價值。 【方法】 采用免疫組化SP法檢測30例有淋巴道轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織和30例無淋巴道轉(zhuǎn)移的鼻咽癌組織中PI3K、pAKT和E-cadherin的表達。應用LY294002抑制P13K的活性，以MTT法觀察不同劑量LY294002對CNE-2Z-H5細胞生長、增殖的作用；用免疫細胞化學分別檢測CNE-2Z及不同劑量LY294002處理培養(yǎng)后的CNE-2Z-H5 細胞中PI3K、pAKT 和 E-cadherin

3、的表達；RT-PCR檢測不同劑量LY294002 處理后的 CNE-2Z-H5 細胞中 E-cadherin mRNA 的表達情況。ELISA法分別檢測CNE-2Z及不同劑量LY294002處理培養(yǎng)后的CNE-2Z-H5細胞中的磷酸化的AKT的含量；用體外細胞侵襲、運動實驗檢測LY294002處理培養(yǎng)后的CNE-2Z-H5 細胞的侵襲和運動的改變；RT-PCR檢測AKT2 mRNA 在CNE-2Z和CNE-2Z-H5中的表達情況。

4、 【結(jié)果】 PI3K、pAKT 和 E-cadherin在非轉(zhuǎn)移組中的陽性率分別為40％(12/30)，46.67％(14/30)，50％(15/30)；在轉(zhuǎn)移組中的陽性率分別為36.67％(11/30)，63.33％(19/30)和40％(12/30)，兩組比較無顯著性差異(P>0.05)。在非轉(zhuǎn)移組中P13K、pAKT 和 E-cadherin 的表達無顯著相關性(P>0.05)，在轉(zhuǎn)移組中PI3K與pAKT、pAKT和E

5、-cadherin、PI3K和E-cadherin之間均無顯著相關性(P>0.05)。 LY294002 對 CNE-2Z-H5 細胞生長、增殖具有抑制作用，而且呈劑量依賴性。在免疫細胞化學實驗中，LY294002作用后CNE-2Z-H5細胞的P13K的蛋白表達減弱，E-cadherin 的蛋白表達增強,而pAKT 的表達無明顯變化。CNE-2Z細胞中的PI3K、pAKT 和 E-cadherin 的蛋白表達與CNE-2Z-H5

6、細胞中的三者表達均無明顯差別。LY294002 可以增加 CNE-2Z-H5 細胞 E-cadherin mRNA 的表達。在LY294002 處理的各組CNE-2Z-H5 細胞能顯著抑制磷酸化的AKT 的表達，并呈一定的劑量依賴性，CNE-2Z 細胞中的pAKT 的表達明顯低于CNE-2Z-H5 細胞，兩者有顯著性差異(P<0.05)。LY294002還可以抑制CNE-2Z-H5細胞的侵襲和運動能力。在CNE-2Z-H5細胞和CNE-

7、2Z細胞中，AKT2 mRNA 的表達無顯著差異。 【結(jié)論】 (1)非轉(zhuǎn)移組和轉(zhuǎn)移組中，PI3K、pAKT和E-cadherin均表達且差異無統(tǒng)計學意義。 (2)PI3K的抑制劑LY294002可以有效抑制鼻咽癌CNE-2Z-H5細胞的生長和增殖，并且呈劑量依賴關系。 (3)具有高轉(zhuǎn)移性質(zhì)的CNE-2Z-H5細胞與其母系CNE-2Z中的PI3K、pAKT和E—cadherin的蛋白表達兩者無顯著性差別；L

8、Y294002可以從mRNA和蛋白水平增加CNE-2Z-H5細胞中E-cadherin的表達，抑制癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移；同時使pAKT的表達降低；LY294002可以降低鼻咽癌細胞的侵襲和運動能力，PI3K/AKT途徑可能是參與鼻咽癌細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移的重要信號傳導通路之一。CNE-2Z和CNE-2Z-H5中與轉(zhuǎn)移密切相關的AKT2在基因水平上的表達無差異，說明該通路促進鼻咽癌細胞的轉(zhuǎn)移可能是通過增加蛋白的翻譯或過度激活蛋白的磷酸化水平來調(diào)控的。