瓊玉膏對衰老大鼠脾臟PI3K-Akt信號通路影響的相關研究.pdf

1、目的:
　　本研究重點探討瓊玉膏通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號通路對D-半乳糖致衰大鼠脾臟的機制研究。在前期的實驗中已經(jīng)篩選出瓊玉膏作用于衰老大鼠脾臟，與衰老有關的靶基因或蛋白，本實驗將利用熒光定量PCR、免疫組化(IHC)及免疫印跡(WB)的方法，通過對這幾個候選靶基因及蛋白所在通路進行分析其蛋白表達情況，望能通過此實驗進一步探索瓊玉膏延緩衰老作用機理，為瓊玉膏的研究和開發(fā)提供一定的理論與實驗依據(jù)。
　　方法:
　　將

2、42只SD大鼠隨機分為三組:空白組、模型組（D-半乳糖致衰）和瓊玉組（D-半乳糖致衰+瓊玉膏治療）。每天用D-gal(250毫克/公斤)和瓊玉膏(14g/kg)治療，連續(xù)62天后，采用Morris圓形水迷宮實驗測試方法來測量大鼠空間學習和記憶能力，并用HE染色來觀察脾臟的病理變化，采用熒光定量PCR和免疫印跡法(WB)檢測脾臟組織HSPBP1和TIMM8B mRNA和蛋白表達情況，通過免疫組織化學方法檢測脾臟組織差異蛋白質(zhì)P-Akt、P

3、-mTOR、Caspase-3、Nrf2和P53的表達情況。
　　結果:
　　一、亞急性衰老大鼠模型建立評估，Morris圓形水迷宮實驗測試。
　　與空白組相比，模型組在第3、4、5和6天登上平臺的時間都明顯增加（P＜0.05），潛伏期呈下降趨勢;與模型組相比，瓊玉膏組在第3、4、5和6天登上平臺的時間都明顯縮短(P＜0.05)，且潛伏期呈下降趨勢;空白組和瓊玉膏組之間無明顯差異。
　　二、熒光定量PCR檢測衰老

4、大鼠脾臟組織HSPBP1、TIMM8B mRNA的表達。
　　與空白組比較，模型組HSPBP1 mRNA的表達明顯升高（P＜0.01），TIMM8B mRNA的表達明顯下降（P＜0.05）;與模型組比較，瓊玉膏組HSPBP1 mRNA的表達明顯下降(P＜0.01)，TIMM8B mRNA的表達明顯升高（P＜0.05）;空白組和瓊玉膏組HSPBP1和TIMM8B mRNA的表達無明顯差異。
　　三、Western Blotti

5、ng檢測衰老大鼠脾臟組織HSPBP1、TIMM8B蛋白的表達
　　與空白組比較，模型組HSPBP1蛋白的表達明顯升高（P＜0.01），TIMM8B蛋白的表達明顯下降(P＜0.001);與模型組比較，瓊玉膏組HSPBP1蛋白的表達明顯下降（P＜0.01），TIMM8B蛋白的表達明顯升高(P＜0.001);空白組和瓊玉膏組HSPBP1蛋白的表達無明顯差異，TIMM8B蛋白的表達有明顯差異(P＜0.001)。
　　四、immuno

6、histochemistry檢測衰老大鼠脾臟組織P-Akt、P-mTOR、Caspase-3、Nrf2和P53蛋白表達的結果
　　與空白組相比，模型組P-Akt和P-mTOR蛋白的表達顯著下降（P＜0.01），caspase-3、p53和Nrf2蛋白的表達顯著升高（P＜0.01）;與模型組相比，瓊玉膏組P-Akt、P-mTOR和Nrf2蛋白的表達顯著上升(P＜0.01);caspase-3和p53蛋白的表達水平顯著下降（P＜0.0

7、1）。
　　結論:
　　一、亞急性衰老大鼠模型建立成功，瓊玉膏具有改善衰老大鼠學習記憶能力。
　　二、瓊玉膏能夠下調(diào)HSPBP1 mRNA及蛋白的表達，能上調(diào)TIMM8B mRNA及蛋白的表達。
　　三、瓊玉膏能夠上調(diào)P-Akt、P-mTOR和Nrf2蛋白的表達，下調(diào)P53蛋白和Caspase-3蛋白，發(fā)揮抗細胞凋亡作用。
　　本實驗研究表明瓊玉膏能夠激活D-半乳糖致衰大鼠脾臟PI3K/Akt信號通路發(fā)揮抗