瓊玉膏干預(yù)衰老大鼠下丘腦炎癥通路相關(guān)蛋白延緩衰老的研究.pdf

1、目的:
　　以瓊玉膏干預(yù)D-半乳糖致亞急性衰老大鼠模型的下丘腦為研究部位，在前期實驗研究基礎(chǔ)上，對通過蛋白質(zhì)組學(xué)中的iTRAQ技術(shù)質(zhì)譜鑒定查找瓊玉膏干預(yù)衰老大鼠下丘腦的差異蛋白進(jìn)行分析，尋找出差異倍數(shù)明顯的候選差異蛋白。再查閱相關(guān)延緩衰老文獻(xiàn)及生物信息學(xué)分析技術(shù)對候選差異蛋白分析，最終確定下丘腦炎癥引起機(jī)體衰老相關(guān)的差異蛋白，并對其進(jìn)行相關(guān)實驗驗證其差異蛋白的表達(dá)量水平，進(jìn)一步探究瓊玉膏通過下丘腦延緩機(jī)體衰老的作用機(jī)制，同時指導(dǎo)下

2、丘腦炎癥引發(fā)機(jī)體衰老的未來研究。
　　方法:
　　1.對前期實驗通過蛋白質(zhì)組學(xué)中的iTRAQ技術(shù)質(zhì)譜鑒定查找瓊玉膏干預(yù)衰老大鼠下丘腦的差異蛋白進(jìn)行分析，鑒定比對瓊玉膏組與模型組的295種差異蛋白，篩選出差異倍數(shù)≥1.30的差異蛋白。
　　2.對篩選出差異倍數(shù)≥1.30的差異蛋白并進(jìn)行排序比對，通過查閱差異蛋白相關(guān)延緩衰老文獻(xiàn)，并進(jìn)行生物信息學(xué)分析，找出瓊玉膏延緩衰老的候選靶蛋白，在確定與下丘腦炎癥通路相關(guān)的蛋白。

3、>　　3.利用免疫印跡法(Western Blot)檢測和重要指標(biāo)做熒光定量PCR(Q-PCR)進(jìn)行分析，觀察瓊玉膏干預(yù)下丘腦炎癥相關(guān)蛋白的表達(dá)水平變化，通過下丘腦炎癥相關(guān)蛋白的不同表達(dá)水平的變化解釋瓊玉膏如何干預(yù)下丘腦炎癥變化延緩衰老的作用機(jī)制，最終確定下丘腦炎癥變化引起機(jī)體衰老的作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.對前期實驗查找到瓊玉膏組與模型組的295種差異蛋白進(jìn)行分析，成功篩選出差異倍數(shù)≥1.30的差異蛋白。
　　

4、2.通過對篩選出差異倍數(shù)≥1.30的差異蛋白并進(jìn)行排序比對、查閱差異蛋白相關(guān)延緩衰老文獻(xiàn)、生物信息學(xué)分析，成功找出下丘腦炎癥通路相關(guān)蛋白NF-κB蛋白、PIP5K1C蛋白、PTPRC/CD45蛋白。
　　NF-κB蛋白的活化是炎癥反應(yīng)的典型表現(xiàn)，通過檢測NF-κB蛋白的激活程度可以反應(yīng)機(jī)體的炎癥狀態(tài);PIP5K1C蛋白和PTPRC/CD45蛋白在機(jī)體的抗炎過程中均有一定的積極作用，二者的表達(dá)量在一定程度上反映了機(jī)體的抗炎能力。

5、r>　　3.對NF-κB蛋白、PIP5K1C蛋白、PTPRC/CD45蛋白進(jìn)行Western Blot和Q-PCR檢測，發(fā)現(xiàn)瓊玉膏抑制了NF-κB蛋白在衰老過程中的表達(dá)，減緩了PIP5K1C蛋白和PTPRC/CD45蛋白在衰老過程中的下降程度。
　　結(jié)論:
　　經(jīng)過瓊玉膏干預(yù)，下調(diào)NF-κB蛋白（引發(fā)下丘腦炎癥的炎癥激活蛋白）的表達(dá);上調(diào)PIP5K1C蛋白和PTPRC/CD45蛋白（對抗機(jī)體炎癥反應(yīng)或者炎癥相關(guān)疾病的蛋白）的

6、表達(dá)。通過實驗研究發(fā)現(xiàn)其作用機(jī)制可以更加明確地解釋為抑制和減緩，即抑制致炎蛋白（如NF-κB蛋白）在外界不良環(huán)境影響下的激活程度，減緩抗炎蛋白（如PIP5K1C蛋白、PTPRC/CD45蛋白）在外界不良環(huán)境影響下的衰退程度。通過對下丘腦炎癥通路相關(guān)蛋白的雙向調(diào)控減輕下丘腦炎癥反應(yīng)，避免下丘腦炎癥反應(yīng)引起的機(jī)體生理功能的衰退，進(jìn)而達(dá)到延緩機(jī)體衰老的目的。
　　下丘腦炎癥反應(yīng)可以引起機(jī)體衰老，其作用機(jī)制跟許多炎癥通路相關(guān)蛋白有一定關(guān)系