Fas介導(dǎo)的信號(hào)通路在ZEA致睪丸支持細(xì)胞凋亡中的作用研究.pdf

1、分類粵．．．．，’| 1 、一 一、 學(xué)號(hào)．叢至麴蘭2u Dc —～ 密 級(jí)—二、| | I I II I I I I I I I I I I I I I I I Ij 。。、，I ，、‘’‘LY 3 4 3 ．3 5 6 0 一一，『I’國(guó)“ Y 埸A N G Z ·H 愀O U U N I V E R S 爭(zhēng)I T Y ’j 。．’_ _碩、j 士學(xué)位論文 o． ( 全日制學(xué)術(shù)學(xué)位)F a s 介導(dǎo)的信號(hào)通路在Z E A

2、致睪丸支持細(xì)胞’凋亡中的作用研究司夢(mèng)雪指導(dǎo)教師姓名：．型室±墼蕉，．揚(yáng)必盤堂。 婆蒸塹趔，2 至量Q Q 窆主蕉查墼塑，塹趔太芏： 婆菱塑．坦，至2 麴壁竺申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別： 塹．±_ ． 學(xué)科專業(yè)名稱：墮鏖簦匡堂論文提交日期：一．至Q 曼墨主．量月 論文答辯日期：2 Q 曼墨主量屋一：學(xué)位授予單位： 2 Q ! = 壁．生魚屋 學(xué)位授予日期：．至Q 超生魚．屋．答辯委員會(huì)主席：董盤查 夔撞．． 2 0 1 8 年6 月

3、司夢(mèng)雪F a s 介導(dǎo)的信號(hào)通路在Z E A 致睪丸支持細(xì)胞凋亡中作用的研究中文摘要玉米赤霉烯酮( Z E A ) 是由鐮刀菌產(chǎn)生的一種具有雌激素樣作用的毒素，廣泛存在于世界各地的谷類糧食中。研究表明，Z E A 結(jié)構(gòu)與1 7 1 3 一雌二醇相似，可拮抗雌激素與受體的結(jié)合和調(diào)節(jié)，影響促性腺激素釋放激素( G n R H ) 的分泌，導(dǎo)致動(dòng)物及人類生殖能力的下降。近年來(lái)，Z E A 可導(dǎo)致雄性動(dòng)物生殖功能障礙的現(xiàn)象受到人們的關(guān)注，但相關(guān)

4、機(jī)制不明。為探明Z E A 雄性生殖毒性的機(jī)理，本試驗(yàn)以分離大鼠原代睪丸支持細(xì)胞為材料，對(duì)Z E A 在體外誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞F a s 介導(dǎo)的凋亡進(jìn)行了研究。1 ．Z E A 對(duì)大鼠睪丸支持細(xì)胞F a s ／F a s L 凋亡信號(hào)通路的影響為探究Z E A 對(duì)睪丸支持細(xì)胞F a s ／F a s L 凋亡信號(hào)通路的影響，采用大鼠原代睪丸支持細(xì)胞為材料，用不同濃度Z E A ( 0 、5 、1 0 、2 0 g m o l ／L ) 處

5、理細(xì)胞2 4 h ，A r m e x i n V ．F I T C ／P I 雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率；W e s t e r n b l o t 及q R T —P C R 檢測(cè)死亡受體通路F a s ／F a s L 相關(guān)蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄情況。用2 0g m o g L Z E A 處理細(xì)胞，于不同染毒時(shí)間( 0 、4 、8 、1 6 h ) 使用W e s t e r n b l o t 檢測(cè)凋亡調(diào)控蛋白F a s 、F a

6、s L 、F A D D 、c l e a v e d ．c a s p a s e ．8 的表達(dá)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各染毒組細(xì)胞凋亡率呈顯著或極顯著升高( P < o ．0 5 或P < 0 ．0 1 ) ；1 0 、2 0I r l m o l ／LZ E A 能極顯著升高F a s 、F a s L 轉(zhuǎn)錄水平( P < O ．0 1 ) ，2 0 g m o l ／LZ E A 能極顯著的升高F A D D

7、 和c a s p a s e ，8 的轉(zhuǎn)錄水平( 尸< 0 ．0 1 ) ；5 l a m o l ／L 以上Z E A 染毒組F a s 、F a s L 、F A D D 、c l e a v e d —c a s p a s e 8 蛋白表達(dá)均顯著或極顯著性升高( 尸< 0 ．0 5 或P < 0 ．0 1 ) 。隨著Z E A染毒時(shí)間的增加，F(xiàn) a s 、F a s L 、F A D D 、c l e a v

8、 e d ．c a s p a s e 8 、c l e a v e d ．c a s p a s e 3 的表達(dá)量均顯著或極顯著高于對(duì)照組( 氏0 ．0 5 或P < 0 ．0 1 ) 。表明Z E A 能誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞凋亡，F(xiàn) a s ／F a s L途徑參與了Z E A 誘導(dǎo)睪丸支持細(xì)胞的凋亡過(guò)程。2 ．F a s 介導(dǎo)的信號(hào)通路在Z E A 致睪丸支持細(xì)胞線粒體凋亡中的作用為探究F a s 介導(dǎo)的信號(hào)通路在Z E A 致

9、原代大鼠睪丸支持細(xì)胞線粒體凋亡中的作用，用不同濃度的Z E A ( 0 、5 、1 0 、2 0 } t m o l ／L ) 、及2 0 } ，t m o l ／L Z E A 與1 0 g m o l ／LZ ．I E T D ．F M K( c a s p a s e ．8 抑制劑) 單獨(dú)或聯(lián)合作用于原代大鼠睪丸支持細(xì)胞，染毒時(shí)間均為2 4 h ，q R T ．P C R 檢測(cè)凋亡相關(guān)基因B a x 、B c l 一2 的轉(zhuǎn)錄水平

10、， W e s t e r n b l o t 檢測(cè)B a x 、B c l 。2 的蛋白表達(dá)、細(xì)胞色素C 的釋放和B I D 、c a s p a s e 一9 與c a s p a s e 一3 蛋白的活化情況，A n n e x i n V —F I T C ／P I雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合熒光探針檢測(cè)線粒體膜電位( △甲m ) 的變化。結(jié)果顯示，隨Z E A 濃度的升高，睪丸支持細(xì)胞促凋基因B a x 的轉(zhuǎn)錄水平和翻