谷子脂轉(zhuǎn)移蛋白基因（Siltp）的功能研究.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文谷子脂轉(zhuǎn)移蛋白基因（Siltp）的功能研究姓名：史夢申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：趙倩20070601A b s t r a c tN o n s p e c i f i c l i p i dt r a n s f e r 刪m C 璐L T P O ，e n c o d e d b y a s m a l lm u l t i g e n ef a m i l yi na d i v

2、e r s i t yo fp l a n t s p e c i e s , 螄4 c l a s s o f s m a l l ．s o l u b l ea n d b - s i c p r o t e i n s ．P l a n tl i p i dt r m m f e r p r o t e i n sw ∽i n i t i a l l yi d e n t i f i e d i ns p i n a c h l

3、e a v e s b a s e d O R 岫證a K I 畸t o f a c i l i t a t e t h e t r a n s f e r o f v a r i c №l i p i d s b e l w ∞M mm e m b r a n e s a n d a r t i f i c i a lv e s i c l e s 脅v i t r o ．T h ei s e s c n e eo f m u l t

4、 i p l em e m b e r s o f t h e L 1 限f a m i l y m a y b ea 伽m ∞q w f 髓o f g e n e d u p l i c a t i o n sa n d s u b s e q u e n t s e q u e n c ev a r i a t i o n , w h i l e t h o s e r e s i d u e sc r u c i a l t of

5、 l m c t i o n 瓣c o h e r e d ．A l t h o u g h t h e n u c k 賊i d e 甜l d a m i n o a c i ds e q u e n c e s h a v ec o n s i d e r a b l ed i v e r g e n c e s , s e v e m l f e a t u r e s a g eh i g h l y c o n s e r v

6、 e d i nt h ee n c o d e d In ，s i n c l u d i n ge i g h t c y s t e i n er e s i d u e s t o f o r m f o u r d i s u l p h i d e b o n d s ．A l l p l a n t L T P s i d e n t i f i e dS O 缸a l s o p o s s e s s a N - 衙m

7、 i n u s s i g n a l腳d d e t h a tl i k e l yd i r e c t st h ep r o t e i nt ot h ee n d o p l e s m i c r e t i e u l u m ㈣，a l o n gw i t h [ K ／H D E L ] E Rr e t e n t i o ns i g n a l 越t l 埒C - t e r m i n u s , w

8、h i c h i se x p e c t e d t h a tL T P s m a y e n t e r t h es e c r e m r yp a t h w a y ．A e D N A a o r , o d i n g l i p i d t r a n s f e rp r o g 婦㈣懈i s o l a t e d f r o m S e t a r t a i t a l i c ae D N A l i

9、b r a r y ．S i l t pc o n t a i n sa n o p e n r e a d i n g f r a i m 睨麟) d i l 培1 2 1a m i a o a c i d s ．T h ef i r s t2 6a m i n o a c i d s i ss u p p o s e d t o b eas i g n a Js e q u e n c e ．T h e m a t u r e p

10、r o t e i n h a s a m o l e c u l a r m a 鷂o f 9 ．3 k D ．＆坳e x p r e s s e s i n s t e m , l e a v e sa n d掣瓶A c c o r d i n g t ot h e r e s u l t s o f B l a s t na n d 8 l a s t pi nG e n B a n L i t s h a r e sh i g

11、hn u e l e o f i d ea n d a m i n oa c i ds e q u e n c e i d e n t i t y w i t h H o r d e u m v u l g a r e a n d Z e a R ／a y $ l i p i d t r a n s f e r p r o t e i n g e n e ．M o r e o v e r , s o m eL T P s i n k I

12、 r l e y a n d m a i z e w e r e f o u n d t oe x h i b i ta n t i m i e r o b i a l a c t i v i t i e s ／n v f l r oa n dp l a y e da s i g n i f i c a n tm l e i np l a n t r e s p o n s e st o p a t h o g e na t t a c

13、 Lh i g h s a l i n i t ya n d d r o u g h tr e s i s t a n c e ．T h i sm l i c l ei st oa n a l y z et h ef I l 僦村蛐o f S i l t p ．m p l a n td e f e n s e ．Ap r o k a r y o t i ce x p r e s s i o nV e c t O l “p T Y B I

14、 1 - s i l t p , w h i c hi su s e d t ot r a n s f o r m E ．C o ／i B L 2 1t op r o d u c eS i l t pm a t u r ep e p t i d e , w a s c o n s t r u c t e d ．T h e t a r g e t p e p t i d e p u r i f i e d b yc h i t k t b

15、 i n d i n g e o l m n n e x h i b i t e d a s i g n i f i c a n t m l e i n i n h i b i t i o n o f t b eg r o w t h o f F u a a r ／w no x y s p o r u m a n dF u s 謝u m s o l a n i ；s i m u l t a n e i t y , a p l a n t

16、 e x p r e s s i o nv e c t o rw i t hS i l t pe D N A u n d e r c o n t r o lo f C a M V 3 5 S p r o m o t e r w a s c o n s t r u c t e da n d t r a n s f o r m e di n t ot o b a c c o ．E i g h t - w e e ko l d t r a n

17、 s g e n i c t o b a c c o p l a n t s w e r ec u l t u r e d u n d e r h i 曲s a l i n i t y 、d r o u g h t o r F u s a r ／u m o x y s p o r w n a t t a c kc o n d i t i o nf o r 7d a y s ．T h er e s u l t ss h o w e d s

18、 o m e U ' a n s g e n i ct o b a c c op l a n t s h a d s t r o n g e rs u r v i v i n g a b i l i t yc o m p a r e d w i t hw i l dt y p et o b a c c o s ；l I | f n M 目T m f i v e - d a yo l dw i l dt y p e S e t a

19、 r i ai t a l i c a p l a n t s 、V e 僻s e p a r a t e l y U e a t e d b y h i g hs a l i n i t y o r d r o u g h t , S i l t p e x p r e s s i o n l e v e l s w e r e p r o m o t e d a f t e r t r e a t e d i n湖p { 匝s ∞w

20、 i t h t h ec o n U ' o lp l a n t st r e a t e dw i t hs t e r i l ew a t e r ．I nc o n c l u s i o n , s “爭W a S p r o v e d t oe x h i b i ta na b i l i t yt O i n h i b i tf h n g a lp a t h o g c a l 掣硼a n d i m

21、 p r o v e t h es m M v a l a b i l i t y o f p l a n t su n d e r b i o t i ca n da b i o t i cs h e s s ．K e y w o r d s ：L i p i d t r a n s f e rp r o t e i n , p r o k a r y o t i ce x p r e s s i o n , W a n s g e