生骨注射液對(duì)骨折愈合影響及其分子機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文研究生骨注射液的制備工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和生骨注射液對(duì)骨折愈合的影響，探討生骨注射液促進(jìn)骨折愈合的作用機(jī)理。方法:采用薄層色譜法對(duì)當(dāng)歸和淫羊藿組分進(jìn)行定性鑒別，采用薄層掃描法測(cè)定淫羊藿苷的含量；通過(guò)手術(shù)造成家兔橈骨中段3mm完全缺損的骨折模型，分成生骨注射液組和對(duì)照組，分別在骨折斷端等量注射生骨注射液和生理鹽水，從骨痂X線(xiàn)評(píng)分、骨密度測(cè)定、生物力學(xué)測(cè)試和骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)等方面進(jìn)行研究；建立SD大鼠脛骨干骨折愈合模型，分成生骨注射液組和對(duì)照

2、組，分別在骨折斷端等量注射生骨注射液和生理鹽水，采用組織學(xué)及免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)兩組大鼠骨折愈合過(guò)程中不同階段骨痂組織中TGF-β、BMP、bFGF和VEGF蛋白的表達(dá)及差異情況；體外培養(yǎng)大鼠成骨細(xì)胞，應(yīng)用MTT法、對(duì)硝基苯磷酸鹽法及茜素紅染色法觀察生骨注射液對(duì)體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞的增殖、ALP表達(dá)及礦化結(jié)節(jié)形成的影響；應(yīng)用RT-PCR、Western-blot技術(shù)檢測(cè)生骨注射液對(duì)成骨細(xì)胞中BMP-2、VEGF的mRNA和蛋白表達(dá)的影響。

3、結(jié)果薄層色譜上均鑒別出當(dāng)歸、淫羊藿的特征斑點(diǎn)，而各陰性對(duì)照品均無(wú)干擾。樣品生骨注射液中淫羊藿苷的平均含量均在0.70％以上；家兔骨折16天時(shí)，生骨注射液組和對(duì)照組相比尚無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)；29天時(shí)，生骨注射液組骨愈合情況明顯優(yōu)于空白組；免疫組織化學(xué)染色顯示，生骨注射液組骨痂組織中TGF-β、BMP、bFGF和VEGF表達(dá)量及陽(yáng)性定位均明顯強(qiáng)于對(duì)照組；生骨注射液對(duì)成骨細(xì)胞具有明顯的促增殖、分化及礦化作用；適當(dāng)濃度的生骨注射液可以增強(qiáng)BMP-2、V

4、EGF的mRNA和蛋白表達(dá)水平，其表達(dá)量隨時(shí)間逐漸增加。結(jié)論該制備工藝穩(wěn)定、可靠、簡(jiǎn)便、可行，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可有效的控制生骨注射液的質(zhì)量；生骨注射液具有明顯促進(jìn)骨折愈合的作用，尤以骨折中后期明顯；生骨注射液能夠增加骨折愈合過(guò)程中TGF-β、BMP、bFGF和VEGF在骨痂組織中的表達(dá)；生骨注射液具有刺激體外培養(yǎng)成骨細(xì)胞增殖、分化和礦化的功能，它對(duì)成骨細(xì)胞中BMP-2、VEGF的mRNA和蛋白表達(dá)有明顯促進(jìn)作用。這些可能是生骨注射液促進(jìn)骨折愈合