養(yǎng)血固腎湯對(duì)大鼠骨折愈合影響的實(shí)驗(yàn)觀察研究.pdf

1、目的:
　　骨折是臨床上常見的疾病之一，主要分為骨小梁中斷裂和骨皮質(zhì)斷裂，而當(dāng)中最棘手的問題是骨折不愈合或延遲愈合。骨折的愈合過程是一個(gè)極其復(fù)雜的過程，當(dāng)中牽涉組織學(xué)、生物學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)及生物力學(xué)等知識(shí)。影響骨折愈合的因素眾多，包括全身因素和局部因素、醫(yī)源性因素、骨生長(zhǎng)因子、微量元素、生物力學(xué)因素。對(duì)于如何促進(jìn)骨折的愈合過程、恢復(fù)骨的正常功能及結(jié)構(gòu)一直是醫(yī)學(xué)界研究的焦點(diǎn)及熱點(diǎn)。學(xué)者們經(jīng)過不同的研究及實(shí)驗(yàn)方法，從多角色去探討，才有現(xiàn)今

2、對(duì)骨折愈合過程的認(rèn)識(shí)。
　　現(xiàn)行的治療骨折的方法很多，而且部份療效顯著，但亦有好多的不足，在這樣立足點(diǎn)上，祖國(guó)醫(yī)治骨折病癥的長(zhǎng)遠(yuǎn)經(jīng)驗(yàn)及技術(shù)累積可以好好發(fā)揮作用，因其有簡(jiǎn)單方便、安全有效、毒副作用低及成本低廉等優(yōu)點(diǎn)，一直被醫(yī)生及患者認(rèn)可。
　　本課題在祖國(guó)醫(yī)學(xué)理論指導(dǎo)下，展開“養(yǎng)血固腎湯”對(duì)骨折愈合過程的促進(jìn)作用效果的研究，嘗試從多角度著手，透過不同層面的觀察，剖析養(yǎng)血固腎湯對(duì)骨折愈合的干涉作用及解釋當(dāng)中的機(jī)制。
　　基

3、于文獻(xiàn)記錄上，有關(guān)觀察“養(yǎng)血固腎湯”對(duì)骨折愈合過程的促進(jìn)作用效應(yīng)研究目前未見報(bào)導(dǎo)。本文起著先導(dǎo)的作用，于不同研究層面上，對(duì)“養(yǎng)血固腎湯”進(jìn)行觀察，從而提高對(duì)“養(yǎng)血固腎湯”于骨折愈合過程的理解，以利指導(dǎo)臨床工作，為推動(dòng)中醫(yī)藥的普及使用出一分綿力。
　　方法:
　　動(dòng)物模型準(zhǔn)備工作:80只SD雄性大鼠，開始體重為168.5～237.2g，四肢無畸形，活動(dòng)自如，生命體征平穩(wěn)，飲食正常，無傳染病，整個(gè)飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)過程在SPF級(jí)環(huán)境內(nèi)進(jìn)

4、行。到體重合適時(shí)實(shí)驗(yàn)開始，于大鼠左脛骨中段行開放性骨折模型造模，行克氏針骨髓腔逆行內(nèi)固定，縫合切口，不包扎。手術(shù)后挑選造模成功的72只大鼠，按體重隨機(jī)分為空白組、對(duì)照組及養(yǎng)血固腎湯劑組，每組24只?？瞻捉M、對(duì)照組及養(yǎng)血固腎湯劑組分別給予純凈水、恒古骨傷愈合劑及養(yǎng)血固腎湯按體重灌胃給藥。
　　第一部份生化指標(biāo)觀察:術(shù)后d7，d14，d24及d35各組按之前隨機(jī)編定的數(shù)字，各解剖6只動(dòng)物，采取血液樣本。用全自動(dòng)生化檢測(cè)儀器，檢查血鈣、

5、血磷及ALP三項(xiàng)生化指標(biāo)。第二部份組織病理學(xué)觀察:于前述每段時(shí)間隨機(jī)解剖的6只動(dòng)物中，處死后取左下肢脛骨連股骨中下段的部分作成標(biāo)本，作組織病理學(xué)分析;根據(jù)組織病理學(xué)指導(dǎo)下，檢測(cè)組織標(biāo)本，用光學(xué)顯微鏡隨性取3個(gè)視野點(diǎn)，觀察骨小梁面積百分?jǐn)?shù)、成骨細(xì)胞指數(shù)及破骨細(xì)胞指數(shù)。第三部份微計(jì)算器斷層掃描技術(shù)(Micro-CT)觀察:于前述每段時(shí)間隨機(jī)解剖的6只動(dòng)物中，隨機(jī)取當(dāng)中3只動(dòng)物，取左下肢脛骨連股骨中下段的部分作成標(biāo)本，送往檢測(cè)中進(jìn)行Micro

6、-Ct檢測(cè)。使用Micro-CT檢測(cè)骨折部位，選取感興建區(qū)(region of interest，ROD)，利用軟件重塑圖像，透過分析圖像及系統(tǒng)檢測(cè)，采集BMD，BV/TV，TV，Tb.Th，Tb.Sp，Tb.N及SMI等多項(xiàng)骨參數(shù)。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:所有數(shù)據(jù)采用((x)±s)表示，應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;計(jì)量資料數(shù)據(jù)方差齊，或數(shù)據(jù)經(jīng)轉(zhuǎn)換后方差齊，則采用單因素方差分析;若數(shù)據(jù)經(jīng)轉(zhuǎn)換后方差仍不齊，采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分

7、析。
　　成果:
　　于生化指標(biāo)上，養(yǎng)血固腎湯劑組實(shí)驗(yàn)早期相比空白組及對(duì)照組明顯增加血磷值(P＜0.05)，以及增加鈣磷乘積值(P＜0.01)，促進(jìn)鈣鹽沉積，血鈣值伴隨減低(P＞0.05)，從而令到血液中的鈣離子進(jìn)入基質(zhì)，由于成骨細(xì)胞的作用，使鈣及磷積聚及結(jié)合，形成鈣鹽沉積，加速骨痂的建立及重塑，有利于骨折愈合的發(fā)展。而當(dāng)中血清的鈣離子濃度亦會(huì)相應(yīng)降低。于組織病理學(xué)上，d7，相比空白組，養(yǎng)血固腎湯劑組在骨痂出現(xiàn)的基礎(chǔ)上，更早

8、出現(xiàn)軟骨痂及骨小梁的排列，個(gè)別動(dòng)物可見機(jī)化的血腫，骨痂內(nèi)可見大量軟骨細(xì)胞及稀疏的骨小梁。d14，相比空白組，養(yǎng)血固腎湯劑組動(dòng)物骨折處可見纖維性骨痂及大量軟骨、致密的骨小梁，于數(shù)量上比較多。d24，相比空白組，養(yǎng)血固腎湯劑組大部分動(dòng)物的骨小梁及骨痂轉(zhuǎn)變加快，表現(xiàn)為骨小梁明顯增粗，外骨痂開始形成板狀骨，骨痂內(nèi)可見少量軟骨細(xì)胞，個(gè)別動(dòng)物骨髓腔再通幾方面。d35，空白組與養(yǎng)血固腎湯劑組部分動(dòng)物俱見外骨痂形成板狀骨，骨髓腔內(nèi)可見骨髓細(xì)胞，部分動(dòng)物

9、骨痂內(nèi)可見少量軟骨細(xì)胞和增粗的骨小梁。反映養(yǎng)血固腎湯能促進(jìn)骨痂的產(chǎn)生時(shí)間，而且對(duì)骨痂其后的改變，如軟骨性骨痂及硬骨痂的產(chǎn)生時(shí)間都有促進(jìn)作用;于骨小梁結(jié)構(gòu)方面同樣有作用，表現(xiàn)為催使骨小梁的結(jié)構(gòu)提早出現(xiàn)及結(jié)構(gòu)稠密度增加兩方面，更能促進(jìn)骨折愈合。于Micro-CT采集的骨參數(shù)結(jié)果中，有關(guān)BMD，BV/TV，TV，Tb.Th，Tb.Sp，Tb.N及SMI各組間未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。d35，相比空白組，SMI數(shù)值明顯接近0，代表骨小梁多呈板狀骨，亦代表

10、骨小梁的強(qiáng)度相比較高，對(duì)比Micro CT數(shù)據(jù)所整合的平面圖像，相比空白組，養(yǎng)血固腎湯能加促骨髓腔再通的時(shí)間，于骨小梁結(jié)構(gòu)方面同樣有作用，表現(xiàn)為催使骨小梁的結(jié)構(gòu)提早出現(xiàn)及結(jié)構(gòu)稠密度增加兩方面，更能促進(jìn)骨折愈合。
　　結(jié)論:
　　1.養(yǎng)血固腎湯能夠升高血磷，使鈣磷乘積高峰顯著升高，促進(jìn)鈣鹽沉積，提高骨折愈合中血清堿性磷酸酶的活性，增強(qiáng)體內(nèi)成骨細(xì)胞的活動(dòng)，促進(jìn)骨折愈合。
　　2.養(yǎng)血固腎湯能促進(jìn)骨痂的產(chǎn)生時(shí)間，而且對(duì)骨痂其