金釵石斛生物總堿對(duì)Aβ25-35所致原代大鼠神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:探討金釵石斛生物總堿(DNLA)對(duì)β-淀粉樣蛋白(Aβ)所致原代培養(yǎng)神經(jīng)元損傷的影響，并探討其可能的機(jī)制。
　　 方法:無(wú)血清方法培養(yǎng)SD大鼠乳鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞，至第7天時(shí)用神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞純度。不同濃度DNLA(0.025mg/L、0.25mg/L、2.5mg/L)預(yù)處理細(xì)胞24h后，用經(jīng)老化處理的Aβ25-35（10μM）造成神經(jīng)元及突觸的損傷，光鏡下觀(guān)察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)的變化;乳酸脫氫酶

2、(LDH)漏出率檢測(cè)細(xì)胞損傷程度;實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time RT-PCR)檢測(cè)突觸后致密物-95(PSD-95) mRNA表達(dá);免疫熒光法檢測(cè)突觸素(SYP)蛋白分布及表達(dá);WesternBlot檢測(cè)PSD-95、SYP蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:1.培養(yǎng)的神經(jīng)元經(jīng)NSE免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)純度可達(dá)86％;2.形態(tài)學(xué)觀(guān)察:空白組細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，模型組細(xì)胞經(jīng)Aβ25-35損傷后數(shù)量減少，細(xì)胞失去折光性，胞體輪廓模糊，突起

3、減少、斷裂，各給藥組細(xì)胞損傷比模型組明顯減輕;3.Aβ25-35損傷細(xì)胞后LDH漏出率升高，PSD-95mRNA及蛋白表達(dá)降低，SYP蛋白表達(dá)下降。與模型組相比，DNLA各劑量均能使PSD-95mRNA表達(dá)升高;DNLA高、中劑量可使LDH漏出率降低、SYP蛋白表達(dá)增高;DNLA高劑量組可使PSD-95蛋白表達(dá)增高。
　　 結(jié)論:1.NDLA能夠明顯減輕Aβ25-35對(duì)原代培養(yǎng)皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞的毒性作用;2.DNLA通過(guò)增加與神經(jīng)發(fā)