糖原合酶激酶-3β在大鼠肝再生中的作用及機(jī)制.pdf

1、糖原合酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)，是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，它參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的多種生命活動(dòng)，如增殖、分化、凋亡、粘附和細(xì)胞因子活性等。新近研究發(fā)現(xiàn)GSK-3β還參與了信號(hào)通路 TNF-α-NFκB的調(diào)控。例如GSK-3β基因敲除小鼠會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重炎癥反應(yīng)缺陷和肝細(xì)胞發(fā)育障礙，致使其胚胎期死于大量肝細(xì)胞凋亡，類似腫瘤壞死因子受體(Tumor necrosis factor recep

2、tor，TNFR)敲除或核因子-κB(Nuclear factor-κB，NF-κB)亞基p65敲除小鼠表型；同時(shí)該基因敲除小鼠的胚胎成纖維細(xì)胞(mouse embryonic fibroblasts，MEF)亦對(duì)腫瘤壞死因子-α (Tumor necrosis factor-α，TNF-α)、脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)等多種炎癥因子有嚴(yán)重反應(yīng)缺陷，導(dǎo)致 TNF-α-NF-κB信號(hào)通路不能激活。 已知

3、在70％肝切除術(shù)所造成的大鼠肝再生模型中 TNF-α-NF-κB信號(hào)通路于肝切后數(shù)h迅速激活，隨后啟動(dòng)多種重要基因如IL-6、iNOS、MMPs、cyclinDl等表達(dá)，從而對(duì)保護(hù)肝細(xì)胞抵抗細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程具有關(guān)鍵性作用。許多文獻(xiàn)表明，一旦 TNF-α-IKK-IκB-NF-κB信號(hào)通路上任一環(huán)節(jié)受阻，肝細(xì)胞對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的凋亡作用尤其敏感，肝細(xì)胞再生進(jìn)程將受嚴(yán)重影響。 考慮到GSK-3β能參與多種重要的細(xì)胞生命活動(dòng)

4、，而同時(shí)目前文獻(xiàn)中關(guān)于GSK-3β在肝再生過(guò)程中的調(diào)控作用尚無(wú)報(bào)道，因此本課題旨在證明以下幾個(gè)問(wèn)題：1、GSK-3β在肝再生過(guò)程是否以及如何變化；2、抑制GSK-3β活性是否影響肝再生；3、如果GSK-3β對(duì)肝再生過(guò)程具有一定調(diào)控作用，其機(jī)制是什么，是否與TSF-α-NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。 因此我們采用肝切前 0.5h靜脈注射GSK-3β專一性抑制劑SB216763的方法使GSK-3β活性受到抑制，而后行大部肝切除術(shù)，取不同再

5、生時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)本檢測(cè)再生肝細(xì)胞的增殖、凋亡以及分子生物學(xué)指標(biāo)等。我們發(fā)現(xiàn)GSK-3β在肝切后0.5h內(nèi)即發(fā)生大量核轉(zhuǎn)位：其次使用GSK-3β專一性抑制劑SB216763抑制其活性可導(dǎo)致大鼠肝切后24h的再生肝細(xì)胞增殖減少，凋亡增加，凋亡蛋白活性增強(qiáng)；再者抑制GSK-3β活性可下調(diào)轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的DNA結(jié)合活性及其下游基因iNOS和IL-6的表達(dá)；此外GSK-3β活性受抑制使再生肝細(xì)胞的p21和COX2的表達(dá)也受到不同影響。因此我們認(rèn)為