血清β-,2--微球蛋白檢測方法的建立.pdf

1、本研究用血清β<,2>-微球蛋白單克隆抗體酶聯(lián)免疫吸附的方法建立規(guī)范的腫瘤病人血清β<,2>-微球蛋白的檢測系統(tǒng)，用于腫瘤病的輔助診斷，從而為動(dòng)物腫瘤疾病的診斷奠定了基礎(chǔ)。首先純化β<,2>-微球蛋白單克隆抗體腹水，其方法是：腹水蛋白質(zhì)經(jīng)采用飽和(NH<,4>)<,2>SO<,4>沉淀法和分子篩相結(jié)合的方法純化后得到β<,2>-微球蛋白單克隆抗體。然后制備酶標(biāo)二抗，具體方法是：用過碘酸鈉將辣根過氧化物酶(HRP)的糖基輕微氧化為醛基，再

2、與抗體氨基進(jìn)行反應(yīng)，形成辣根過氧化酶(HRP)與抗體的結(jié)合物；將β<,2>-微球蛋白單克隆抗體與過氧化物酶的結(jié)合物進(jìn)行純化，得到酶結(jié)合物。最后以建立腫瘤病人血清β<,2>-微球蛋白的檢測系統(tǒng)：采用方陣法確定β<,2>-微球蛋白單克隆抗體包被濃度和酶標(biāo)二抗?jié)舛?，最佳抗體包被濃度和最佳酶標(biāo)二抗?jié)舛确謩e為1：128000和1：1000，并用ROC曲線法確定血清β<,2>-微球蛋白單克隆抗體EUSA法檢測的cut-off值，該值為0.35～0.

3、4。靈敏度和特異性達(dá)到相對(duì)較高水平，ROC曲線下面積均大于總面積的均大于0.7，顯示檢測系統(tǒng)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義和可用性。將β<,2>-微球蛋白單克隆抗體蛋白檢測法的腫瘤病檢出率與腫瘤相關(guān)物質(zhì)聯(lián)合檢測試劑盒法和對(duì)比，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。用spss11.5軟件分析結(jié)果：最小期望頻數(shù)為7.6，N>40，x<'2>=0.551，df=1，P>0.05，可認(rèn)為β<,2>-微球蛋白單克隆抗體蛋白檢測法的腫瘤病檢出率與腫瘤相關(guān)物質(zhì)聯(lián)合檢測試劑盒法檢測腫瘤病無