β2微球蛋白電化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的建立.pdf

1、目前我國(guó)尿毒癥患者已經(jīng)超過(guò)一百萬(wàn)人，β2微球蛋白是存在于尿毒癥患者體內(nèi)的中分子，長(zhǎng)期積累β2微球蛋白會(huì)使關(guān)節(jié)周圍組織、消化道和心血管等部位發(fā)生各種并發(fā)癥，嚴(yán)重者可死于充血性心力衰竭。在健康人血清中β2微球蛋白濃度相對(duì)穩(wěn)定，一般為1.5-3mg/L，但在尿毒癥病人血清中其含量可以達(dá)到20-50mg/L，有時(shí)甚至達(dá)到100mg/L。早期診斷的目的在于早發(fā)現(xiàn)早治療，通過(guò)對(duì)特定標(biāo)志物的診斷了解病情，制定最佳的治療方案，從而達(dá)到治愈患者的目的。早

2、期腎衰竭對(duì)患者的治療是一個(gè)至關(guān)重要的時(shí)期，因此建立一種方便快速、高靈敏度的檢測(cè)方法對(duì)預(yù)防、控制腎衰竭的發(fā)病有至關(guān)重要的作用。本論文搭建了實(shí)驗(yàn)室電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)平臺(tái)，用于β2微球蛋白的檢測(cè)，具體的工作內(nèi)容主要從以下幾個(gè)方面展開:
　　(1)磁性石墨電極的制作
　　建立了一種新的磁性工作電極的制作方法，并對(duì)該電極導(dǎo)電性能和磁吸附性能進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果表明石墨棒電極尺寸為直徑5mm，高3mm時(shí)有較高的磁感應(yīng)強(qiáng)度，達(dá)到235.7mT;石墨

3、電極具有良好的導(dǎo)電性能，并對(duì)磁性微球有較好的捕獲效果。
　　(2)磁性微球表面抗體固載方法的建立和優(yōu)化
　　磁性微球具有大的比表面積，能大量固載抗體，并在外加磁場(chǎng)作用下和溶液快速分離等特點(diǎn)。本章以磁性微球?yàn)檩d體建立抗體固載方法，通過(guò)ELISA方法檢測(cè)β2微球蛋白的含量。由結(jié)果可知，0.1mg的磁性微球最多可以結(jié)合200μL10μg/mL小鼠抗β2微球蛋白抗體，以磁性微球?yàn)檩d體的ELISA方法檢測(cè)β2微球蛋白線性范圍為0.01

4、μg/mL-10μg/mL，檢測(cè)靈敏度達(dá)到0.01μg/mL。
　　(3)以磁性微球?yàn)檩d體檢測(cè)β2微球蛋白電化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的建立
　　以磁性微球?yàn)檩d體，通過(guò)免疫反應(yīng)將β2微球蛋白和熒光分子標(biāo)記到微球表面，利用磁性石墨電極捕獲磁性微球，采用循環(huán)伏安法測(cè)量發(fā)光信號(hào)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，在pH=7的0.1mol/L的PBS緩沖液，掃描速度150mV/s的條件下可以檢測(cè)到最大發(fā)光信號(hào)。
　　通過(guò)論文研究，構(gòu)建了實(shí)驗(yàn)室β2微球蛋白