生物條形碼模式電化學發(fā)光免疫分析方法與應用研究.pdf

1、本論文對電化學發(fā)光免疫分析法（ECLIA）、生物條形碼技術（BBA）及其應用作了系統(tǒng)的概述。因具有良好的導電性、生物相容性及大的比表面積等，石墨烯、納米金等納米材料被廣泛應用于構建免疫傳感器；BBA檢測方法具有極高的靈敏度、良好的特異性及廣泛的檢測范圍，被用于蛋白質(zhì)、核酸等的檢測。本研究工作將 BBA、ECLIA和納米材料相結(jié)合，開發(fā)出一系列 ECL免疫傳感器，實現(xiàn)對人體內(nèi)痕量腫瘤標志物的超高靈敏度檢測。
　　1、基于石墨烯-透明

2、質(zhì)酸-魯米諾復合材料的免標記電化學發(fā)光免疫傳感器及其神經(jīng)降壓素檢測應用
　　基于墨西哥草帽模型構建了一種超靈敏的、夾心型 ECL免疫傳感器檢測人類血清和尿液中的神經(jīng)降壓素（Neurotensin，NT）。石墨烯-透明質(zhì)酸-魯米諾（G-HY-luminol）復合物固定到玻碳電極（GCE）表面構建免疫傳感器，其中，通過 luminol用來發(fā)射即時 ECL信號。作為墨西哥草帽模型的Ab2用來識別 NT形成夾心型免疫復合物，從而導致 EC

3、L信號強度降低，故有效提高檢測靈敏度。實驗結(jié)果顯示，降低值的增加與NT濃度的對數(shù)之間呈現(xiàn)良好的線性，線性范圍為0.001pg/mL~100pg/mL，檢測限為0.001 pg/mL。此外，該傳感器具有令人滿意的穩(wěn)定性、特異性、再生性、重現(xiàn)性及應用性。因此，在臨床診斷上，該 ECL免疫傳感器為小分子質(zhì)量的NT類多肽的實際檢測提供了一種可能。
　　2、基于生物條形碼模式標記導電納米球的電化學發(fā)光免疫傳感器檢測腫瘤標志物
　　基于

4、生物條形碼模式開發(fā)了一種夾心型 ECL免疫傳感器高靈敏度、高選擇性檢測腫瘤標志物。Ab2和異魯米諾（ABEI）同時標記在導電納米球表面來構建 ABEI/Ab2-CNSs導電探針，其中，ABEI作為發(fā)光體發(fā)射 ECL信號，Ab2用來識別抗原以形成夾心型免疫復合物。導電納米球表面的金層可有效地拓展ECL免疫傳感器的赫姆霍茲面（OHP），得益于此，固定在導電納米球表面的作為條形碼的所有 ABEI分子均可發(fā)射即時 ECL信號，且不會影響 Ab2

5、的免疫活性?；谶@種情況，免疫傳感器的靈敏度有了極大地提高，這是因為，一個P抗原分子對應有一個導電納米球，而導電納米球表面標記了成千上萬的可發(fā)射ECL信號的ABEI分子。本研究以 PSA為目標腫瘤標志物，實驗結(jié)果顯示，ECL信號強度與PSA濃度的對數(shù)在0.04~10 fg/mL區(qū)間內(nèi)顯示良好的線性關系，線性相關系數(shù) r為0.9988。另外，該傳感器具有較好的穩(wěn)定性、特異性、再生性及重現(xiàn)性。因此，本研究構建的ECL免疫傳感器在臨床診斷上對

6、于腫瘤標志物及疾病類相關蛋白質(zhì)的實際檢測有潛在的應用價值。
　　3、基于免疫磁珠及磁性電極的電化學發(fā)光免疫傳感器檢測前列腺特異性抗原（PSA）
　　基于免疫磁珠及磁性電極開發(fā)了一種高靈敏度檢測 PSA的ECL免疫傳感器?；谏飾l形碼模式標記 ABEI/Ab2-CNSs導電探針作為ECL信號發(fā)射源。通過磁力作用將鏈霉親和素修飾的免疫磁珠、生物素修飾的PSA抗體、PSA及ABEI/Ab2-CNSs探針組成的免疫復合物修飾到磁性