化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)

1、化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassayCLIA)是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合，用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測分析技術(shù)。是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析和時間分辨熒光免疫分析之后發(fā)展起來的一項最新免疫測定技術(shù)。目錄1簡介2原理3類型1.3.1化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析2.3.2化學(xué)發(fā)光酶免疫分析3.3.3HRP標(biāo)記的C

2、LEIA4.3.4增強發(fā)光酶免疫分析5.3.5ALP標(biāo)記的CLEIA4其他發(fā)光免疫分析技術(shù)1簡介簡介上世紀(jì)70年代中期Arakawe首先報道CLIA，發(fā)展至今已經(jīng)成為一種成熟的、先進的超微量活性物質(zhì)檢測技術(shù)，應(yīng)用范圍廣泛，近10年發(fā)展迅猛，是目前發(fā)展和推廣應(yīng)用最快的免疫分析方法，也是目前最先進的標(biāo)記免疫測定技術(shù)，靈敏度和精確度比酶免法、熒光法高幾個數(shù)量級，可以完全替代放射免疫分析、徹底淘汰酶聯(lián)免疫分析。主要具有靈敏度高、特異性強、試劑價

3、格低廉、試劑穩(wěn)定且有效期（618個月）、方法穩(wěn)定快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程CLEIA)應(yīng)屬酶免疫分析只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑操作步驟與酶免分析完全相同[5]:以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)(如酶標(biāo)記的抗原或抗體)進行免疫反應(yīng)免疫反應(yīng)復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物在信號試劑作用下發(fā)光用發(fā)光信號測定儀進行發(fā)光測定。目前常用的標(biāo)記酶為辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)它們有各自的發(fā)光底物。HRPHRP標(biāo)記的標(biāo)記的CLEIACLEIA常

4、用的底物為魯米諾(32氨基鄰苯二甲酰肼luminol)或其衍生物如異魯米諾(42氨基鄰苯二甲酰肼)是一類重要的發(fā)光試劑。魯米諾的氧化反應(yīng)在堿性緩沖液中進行在過氧化物酶及活性氧[過氧化陰離子(O2)單線態(tài)氧(1O2)羥自由基(OH)過氧化氫(H2O2)]存在下生成激發(fā)態(tài)中間體當(dāng)其回到基態(tài)時發(fā)光其波長為425nm。早期用魯米諾直接標(biāo)記抗原(或抗體)但標(biāo)記后發(fā)光強度降低而使靈敏度受到影響。近來用過氧化物酶標(biāo)記抗體進行免疫反應(yīng)后利用魯米諾作為發(fā)

5、光底物在過氧化物酶和起動發(fā)光試劑(NaOH2H2O2)作用下魯米諾發(fā)光發(fā)光強度依賴于酶免疫反應(yīng)物中酶的濃度。KodakAmerliteTM半自動分析系統(tǒng)就是利用這一體系專門設(shè)計的。增強發(fā)光酶免疫分析增強發(fā)光酶免疫分析(enhanced(enhancedlumlumines2cenceines2cenceenzymenzymeimmimmunoassayunoassayELEIAELEIA)在發(fā)光系統(tǒng)中加入增強發(fā)光劑如對2碘苯酚等以增強發(fā)

6、光信號并在較長時間內(nèi)保持穩(wěn)定便于重復(fù)測量從而提高分析靈敏度和準(zhǔn)確性。在全自動分析儀上還可通過計算機嚴(yán)密控制進行自動操作如加試劑混合溫育洗滌加發(fā)光試劑發(fā)光計數(shù)數(shù)據(jù)處理繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線直至完成病人血清樣品的分析并打印出結(jié)果。AmerliteTM發(fā)光增強酶免分析系統(tǒng)用熒光素、噻唑等增強劑其發(fā)光時間可持續(xù)長達20min試劑盒有甲狀腺功能檢測的促甲狀腺素、三碘甲腺原氨酸、甲狀腺素、甲狀腺素結(jié)合球蛋白、游離甲狀腺素與性激素有關(guān)的有促黃體激素、促卵泡激素

7、、人絨毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睪酮以及其他方面的如癌胚抗原、鐵蛋白、地高辛等。ALPALP標(biāo)記的標(biāo)記的CLEIACLEIA所用底物為環(huán)122二氧乙烷衍生物這是一類很有前途的發(fā)光底物用于化學(xué)發(fā)光酶免分析底物而設(shè)計的分子結(jié)構(gòu)中包含起穩(wěn)定作用的基團——金剛烷基其分子中發(fā)光基團為芳香基團和酶作用的基團在酶及起動發(fā)光試劑作用下引起化學(xué)發(fā)光。最常使用的底物是AMPPD[32(2’2spiroadaman2tane)42methoxy242