β2-微球蛋白檢測(cè)試劑的研發(fā)及臨床應(yīng)用.pdf

1、目的:
　　 1.依據(jù)膠乳增強(qiáng)免疫比濁法的基本原理，研發(fā)出一種具有自我知識(shí)產(chǎn)權(quán)的β2-微球蛋白(BMG)檢測(cè)試劑，為臨床提供一種診斷性能好、具有價(jià)格優(yōu)勢(shì)的試劑。
　　 2.應(yīng)用研究的β2-微球蛋白檢測(cè)試劑檢測(cè)糖尿病患者血清β2-微球蛋白含量并評(píng)價(jià)其應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法:
　　 1.將大小均一的膠乳和碳化二亞胺反應(yīng)進(jìn)行羧化，然后和商品抗體共價(jià)結(jié)合，得到免疫微球。觀察免疫微球和β2-微球蛋白的反應(yīng)情況，確定

2、制備β2-微球蛋白試劑的膠乳直徑、碳化二亞胺用量、β2-微球蛋白抗體用量、攪拌時(shí)間及PEG濃度的最佳條件，建立自制試劑在日立7600分析系統(tǒng)下的最佳反應(yīng)體系。并對(duì)成品試劑的批內(nèi)、批間變異、線性范圍、檢出限、回收性能、抗干擾性、穩(wěn)定性性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 2.采集糖尿病病人(n=150)和健康對(duì)照者(n=65)靜脈血和留取糖尿病病人24小時(shí)尿液以測(cè)定血清β2-微球蛋白、尿素、肌酐以及24小時(shí)尿蛋白含量，每一實(shí)驗(yàn)參與者的血清β2-微

3、球蛋白均使用自研試劑和北京利德曼試劑進(jìn)行測(cè)定，依據(jù)24小時(shí)尿蛋白結(jié)果對(duì)糖尿病病人進(jìn)行分組，比較各實(shí)驗(yàn)組血清β2-微球蛋白、尿素、肌酐水平的差異，對(duì)糖尿病腎病患者血清β2-微球蛋白與尿素、肌酐、24小時(shí)尿蛋白量進(jìn)行相關(guān)性分析，并利用ROC曲線評(píng)價(jià)β2-微球蛋白診斷糖尿病腎病的效能，以探討糖尿病患者血清β2-微球蛋白檢測(cè)的臨床意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.膠乳直徑為125nm，碳化二亞胺的最佳用量為8％(w/w)，最佳攪拌

4、時(shí)間為2小時(shí)，膠乳和抗體的最佳比例為4∶1(w/w)，PEG最佳濃度2.0％。最佳加樣量為3μl，試劑1加樣量為160μl，試劑2加樣量為40μl，波長(zhǎng)600nm,反應(yīng)時(shí)間10分鐘。低、中、高三個(gè)不同濃度的批內(nèi)CV分別為3.50％、2.89％和2.68％;批間CV分別為3.39％、3.23％和3.88％;線性范圍為0～19.2mg/L;最低檢測(cè)限為0.2mg/L;回收率為95.00％～102.50％，平均回收率為98.98％;在血清中血

5、紅蛋白≤10g/L、膽紅素濃度≤340ummol/L和甘油三酯≤10mmol/L時(shí)，對(duì)β2-微球蛋白的測(cè)定沒有顯著性干擾;自研試劑和利德曼試劑的相關(guān)性為0.998;試劑于4-8℃存放可穩(wěn)定放置至少6個(gè)月，室溫下能放置3周，37℃至少可放置7天。
　　 2.采用24小時(shí)尿蛋白作為分組依據(jù)，以24小時(shí)尿蛋白＜150mg/d為界將糖尿病患者分為35例的單純糖尿病組和115例的糖尿病并腎損害二大組，糖尿病并有腎損害組再依據(jù)24小時(shí)尿蛋白

6、量分為24小時(shí)尿蛋白為150～1000mg/d的輕度蛋白尿組(n=52)、24小時(shí)尿蛋白為1000mg～3500mg/d的中度蛋白尿組(n=43)、24小時(shí)尿蛋白大于3500mg/d的重度蛋白尿組（n=20）。
　　 3.正常對(duì)照組、單純糖尿病組、輕度蛋白尿組、中度蛋白尿組和重度蛋白尿組血清尿素水平分別為4.94±0.98、5.03±1.58、4.89±2.38、13.42±5.04、20.92±9.78mmol/L。五組血清肌

7、酐水平分別為84.30±21.70、78.47±18.73、80.71±25.23、171.34±101.63、430.16.±183.72μmol/L。五組血清β2-微球蛋白水平分別為1.68±0.71、1.62±0.83、3.51±0.81、6.71±1.12、8.46±1.85mg/L。可見糖尿病腎病中，輕度蛋白尿組血清尿素、肌酐水平與正常對(duì)照組和單純糖尿組差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，中、重度蛋白尿組血清尿素、肌酐水平才與正常對(duì)照組、單純

8、糖尿病組、輕度蛋白尿組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。而血清β2-微球蛋白在輕度蛋白尿組即開始顯著升高，與正常對(duì)照組和單純糖尿病組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。糖尿病腎病患者血清β2-微球蛋白與尿素、肌酐及24h尿蛋白均呈明顯的正相關(guān)關(guān)系。利用ROC曲線對(duì)各指標(biāo)診斷糖尿病腎損傷的效能進(jìn)行分析，結(jié)果為β2-微球蛋白對(duì)糖尿病并有腎損害組診斷的敏感性為95.9％，尿素、肌酐對(duì)糖尿病并有腎損害組診斷的的敏感性分別為80.1％和78.1％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

9、義(P＜0.05)。β2-微球蛋白的ROC曲線下面積為0.968，尿素、肌酐的ROC曲線下面積分別為0.798和0.743(P＜0.05)，顯示β2-微球蛋白在對(duì)糖尿病腎損害的診斷上明顯優(yōu)于尿素、肌酐。
　　 4.對(duì)自研試劑和利德曼試劑分別檢測(cè)血清β2-微球蛋白的結(jié)果進(jìn)行直線回歸分析，得回歸方程為Y=0.03+0.994X，r=0.999，可以認(rèn)為兩種試劑具有極佳的正相關(guān)(p＜0.01);其中b=0.996，a=0.01065，