ASGM1介導PTX預(yù)處理小鼠發(fā)生過敏樣休克的作用及機制.pdf

1、背景：
　　過敏性休克的主要發(fā)病機制為:變應(yīng)原與肥大細胞表面特異性IgE結(jié)合,介導IgE受體FcεRI交聯(lián),激活肥大細胞使之脫顆粒并釋放組胺等過敏性介質(zhì),導致過敏反應(yīng)發(fā)生。此外,變應(yīng)原也可與特異性IgG1抗體結(jié)合,介導FcγRIII交聯(lián),激活嗜堿粒細胞而引發(fā)過敏性休克,PAF是參與此機制的主要效應(yīng)分子。但是,上述機制并不能用于解釋臨床患者和實驗動物所見的全部過敏反應(yīng)現(xiàn)象。作者前期實驗發(fā)現(xiàn),給EAE小鼠或經(jīng)PTX預(yù)處理的小鼠注射抗A

2、SGM1抗體,可導致體溫降低、活動能力下降甚至死亡等過敏樣休克癥狀。
　　目的：
　　進一步證實抗ASGM1抗體可導致PTX預(yù)處理的小鼠發(fā)生過敏樣休克,并探討其作用機制。
　　方法：
　　1.動物模型制備:在第0天和第2天腹腔注射PTX,第7天通過腹腔或尾靜脈分別注射抗ASGM1抗體、抗PK136抗體、PAF、PTX和重組鞭毛蛋白。
　　2.體內(nèi)封閉:使用不同抗體和拮抗劑處理,如抗MAR-1抗體清除嗜堿粒細

3、胞;抗PK136抗體用于清除NK細胞和NKT細胞;氯化釓(GdCl3)用于清除單核/巨噬細胞;triprolidine抑制組胺作用;CV-3988抑制PAF作用。
　　3.檢測指標:
　　(1)流式細胞術(shù)檢測細胞表面ASGM1表達,及PTX處理組嗜堿粒細胞數(shù)量變化和功能改變;ELISA檢測血清IgE水平。
　　(2)體外培養(yǎng)骨髓來源嗜堿粒細胞,觀察抗ASGM1抗體刺激后胞漿鈣離子濃度和ERK磷酸化反應(yīng),以及LysoPA

4、FAT/LPCAT2mRNA水平改變。
　　(3)Evansblue檢測血管通透性,鬼筆環(huán)肽檢測F-actin(反映PAF和PTX對內(nèi)皮細胞的作用)。
　　(4)Real-time PCR、組織免疫熒光和WB檢測PTX處理對組織和內(nèi)皮細胞IL-33合成和釋放的影響。
　　結(jié)果:
　　1.抗ASGM1抗體和細菌鞭毛蛋白均可通過ASGM1介導PTX預(yù)處理小鼠發(fā)生過敏樣休克。
　　2.ASGM1介導的過敏樣休克中

5、,嗜堿粒細胞是主要效應(yīng)細胞,PAF是主要效應(yīng)分子。
　　3.抗ASGM1可直接導致嗜堿粒細胞胞漿鈣離子濃度升高、ERK通路活化,活化的嗜堿粒細胞可合成、釋放PAF。
　　4.PTX處理可直接導致血管通透性升高,并升高內(nèi)皮細胞對PAF敏感性,小鼠易發(fā)過敏性休克。
　　5.PTX處理可致嗜堿粒細胞升高,提高IgE水平,增強嗜堿粒細胞功能。
　　6.PTX處理可促進組織及內(nèi)皮細胞釋放IL-33。
　　結(jié)論: