豬GNMT和GLP-1R基因的克隆、多態(tài)性分析及組織表達(dá)譜研究.pdf

1、本研究根據(jù)國(guó)內(nèi)外最新的關(guān)于豬7號(hào)染色體與人6號(hào)染色體基因圖譜同源區(qū)段比較的研究進(jìn)展以及豬生產(chǎn)性狀的QTL的定位信息，從該區(qū)段中尋找了2個(gè)與豬生產(chǎn)性狀有關(guān)的基因進(jìn)行了研究，并取得了以下結(jié)果： 1．GNMT (Glycine-N-Methyltransferase，甘氨酸-N-甲基轉(zhuǎn)移酶)。 (1)所編碼的酶是肝臟中影響氨基酸代謝的關(guān)鍵酶之一，S．Ponsuksili等于2005年將此基因定位于豬第7號(hào)染色體77cM處，這個(gè)

2、位置正好位于一個(gè)與脂肪性狀有關(guān)的QTL區(qū)域(75-117cM)及一個(gè)與胴體長(zhǎng)度有關(guān)的QTL(79-126cM)內(nèi)。本實(shí)驗(yàn)在已知其mRNA序列的基礎(chǔ)上，利用序列同源性獲得了該基因全部共5個(gè)內(nèi)含子序列； (2)在第一內(nèi)含子第69bp處發(fā)現(xiàn)了大白T/梅山G的堿基突變，創(chuàng)建了PCR-AsuC2I-RFLP法在大白和梅山2個(gè)純種群體中檢測(cè)了這個(gè)SNP確實(shí)存在，并通過(guò)計(jì)算基因頻率和基因型頻率分析了此SNP的遺傳效應(yīng)，同時(shí)在大白×梅山F<,2

3、>代146頭的資源家系中與豬胴體性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)此突變位點(diǎn)與豬中驅(qū)、腰肌的重量以及前驅(qū)和后驅(qū)的肥、瘦肉的重量，肥肉率，瘦肥比率呈相關(guān)顯著(p<0.05)，與前驅(qū)和后驅(qū)重量以及前驅(qū)、中驅(qū)、后驅(qū)的瘦肉重量，瘦肉率成極顯著相關(guān)(p<0.01)。 (3)利用半定量RT-PCR的方法在豬同一生長(zhǎng)階段同一品種的10個(gè)不同組織中研究了該基因的組織表達(dá)譜，分析發(fā)現(xiàn)，該基因在肝臟中表達(dá)量最高。 2．GLP-lR(Glucagon-

4、Like Peptide-1，胰高血糖素樣肽1受體)。 (1)能促進(jìn)胰島素的分泌、刺激B細(xì)胞的增生、介導(dǎo)GLP-1在人類骨骼肌細(xì)胞中發(fā)揮與胰島素類似的功能，包括刺激糖元合成、提高糖元合成酶a的活性、促進(jìn)葡萄糖之氧化和利用、抑制糖元磷酸化等。該基因已經(jīng)被定位于人染色體的6p21。本實(shí)驗(yàn)利用NCBI網(wǎng)站所提供的豬GLP-1R EST序列以及人、鼠該基因的同源性獲得了部分編碼區(qū)序列以及內(nèi)含子和3’UTL； (2)在第10內(nèi)含子

5、的第272bp處發(fā)現(xiàn)大白C/梅山T的堿基突變，建立了SNP的PCR-Eco130 I-RFLP檢測(cè)方法，在計(jì)算此SNP基因頻率及基因型頻率的基礎(chǔ)上分析了其遺傳效應(yīng)，同時(shí)在大白×梅山F<,2>代135頭的資源家系中與豬胴體性狀進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)此突變位點(diǎn)豬與板油重、花油重、肩部最厚處背膘厚、三點(diǎn)平均背膘厚、眼肌高、眼肌寬以及前驅(qū)、中驅(qū)、后驅(qū)的肥肉重呈現(xiàn)顯著相關(guān)(p<0.05)，與左片胴體重及肥肉率呈相關(guān)極顯著(p<0.01)。