豬Pit-1基因分子遺傳多態(tài)性研究.pdf

1、催乳素(Prolactin,PRL)、生長激素(Growth Hormone,GH)、促甲狀腺素(Thyroid-stimulating Hormone,TSH)是動(dòng)物垂體前葉分泌的具有重要生理功能的激素.而垂體特異性轉(zhuǎn)錄因子(Pituitary-Specific Transcription Factor)Pit-1則是動(dòng)物垂體前葉特異表達(dá)的一種具有重要功能的轉(zhuǎn)錄因子,它與垂體中PRL基因、GH基因、TSH基因以及Pit-1自身的啟動(dòng)子

2、結(jié)合,調(diào)控這些基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá),從而影響動(dòng)物的生長、發(fā)育和繁殖.該研究的目的是通過分子生物技術(shù)手段,尋找豬Pit-1基因序列中的多態(tài)位點(diǎn),為后續(xù)深入研究提供理論依據(jù).試驗(yàn)選用北京黑豬、沂蒙黑豬、萊蕪豬、巴馬小型豬、滇南小耳豬、五指山豬、香豬7個(gè)中國地方豬品種以及英系大白豬、長白豬、法系大白豬、杜洛克4個(gè)國外引入品種(系)共11個(gè)試驗(yàn)動(dòng)物群體508頭個(gè)體.采用PCR-SSCP和PCR-RFLP分析方法研究豬Pit-1基因的遺傳變異,研究結(jié)

3、果如下:1.應(yīng)用PCR-SSCP技術(shù),利用引物P<,1>,在7個(gè)中國地方豬種Pit-1基因第4外顯子上發(fā)現(xiàn)了一個(gè)突變位點(diǎn).序列測定結(jié)果表明,其單核苷酸變異是由堿基C→T的替換造成的,但并沒有導(dǎo)致編碼氨基酸的改變,均編碼組氨酸.對7個(gè)中國地方豬群體共計(jì)347頭個(gè)體的基因型進(jìn)行了檢測與統(tǒng)計(jì)分析,Hardy-Weinberg平衡適合性檢驗(yàn)結(jié)果表明:在這7個(gè)群體中,沂蒙黑豬、巴馬小型豬群體的基因頻率和基因型頻率都處于平衡狀態(tài)(P>0.05),而

4、北京黑豬、萊蕪豬、滇南小耳豬、五指山豬、香豬群體則未達(dá)到平衡狀態(tài)(P<0.05);另由多態(tài)信息含量(PIC)值的計(jì)算可知此基因座位在萊蕪豬和五指山豬群體中多態(tài)性不高,遺傳變異不大,而在北京黑豬、沂蒙黑豬、巴馬小型豬、滇南小耳豬和香豬群體中則呈現(xiàn)中度多態(tài).2.應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù),利用引物P<,3>,在4個(gè)國外引入豬種(系)Pit-1基因的包含部分內(nèi)含子4、全部外顯子5、內(nèi)含子5、外顯子6及部分3'側(cè)翼的1747bp的擴(kuò)增片段中檢測到

5、多個(gè)突變位點(diǎn),并驗(yàn)證了一個(gè)RsaI-RFLP多態(tài)位點(diǎn),在此位點(diǎn)上產(chǎn)生了A、B兩個(gè)等位基因.測序分析表明:其多態(tài)性的產(chǎn)生是由于第542位堿基G→C的替代造成的.該切點(diǎn)存在時(shí)產(chǎn)生的片段為等位基因A,消失時(shí)產(chǎn)生的片段為等位基因B.在英系大白豬、長白豬、法系大白豬、杜洛克4個(gè)國外引入品種(系)群體共計(jì)161頭個(gè)體中分析了此突變位點(diǎn)的基因型情況,Hardy-Weinberg平衡適合性檢驗(yàn)結(jié)果表明:英系大白豬和杜洛克豬群體處于平衡狀態(tài)(P>0.05

6、),而長白豬和法系大白豬群體未處于平衡狀態(tài)(P<0.05);另由多態(tài)信息含量(PIC)值的計(jì)算可見,4個(gè)國外引入品種(系)豬群體均處于中度多態(tài),說明此基因座位在這4個(gè)國外引入品種(系)豬群體中多態(tài)性高,遺傳變異大.同時(shí),經(jīng)過預(yù)測,發(fā)現(xiàn)其中的一個(gè)SNP可能使豬內(nèi)含子5中出現(xiàn)了新的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn).3.利用引物P<,4>成功地克隆山豬Pit-1基因的部分外顯子3及全部內(nèi)含子3的序列.從而為豬Pit-1基因的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ).該試驗(yàn)在Pi