鼻粘膜耐受對實驗性自身免疫性重癥肌無力大鼠胸腺Caspases-9、Caspases-3表達的影響.pdf

1、目的：
　　 1，探討凋亡相關(guān)基因Caspases-9和Caspases-3在實驗性自身免疫性重癥肌無力（EAMG）大鼠胸腺中的表達及其意義。
　　 2，研究鼻粘膜耐受對EAMG臨床及胸腺Caspases-9和Caspases-3表達的影響，研究凋亡機制在MG免疫耐受機制中的作用,為鼻粘膜免疫耐受治療MG提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 人工合成的鼠源肽段Rα97-116與完全氟氏佐劑（CFA）充分乳化

2、后四點皮下注入6-8周齡雌性Lewis大鼠，在第30、60天強化注射與不完全氟氏佐劑（IFA）充分混合后的同等量肽段構(gòu)建EAMG大鼠模型。正常對照組同期注入等量的磷酸鹽緩沖液(PBS)。通過稱量實驗大鼠體重，進行Lennon臨床評分，低頻重復神經(jīng)電刺激（RNES）觀察電衰減反應(yīng)，ELISA法檢測血漿中AchR-Ab(IgG) 滴度明確EAMG大鼠是否成模。EAMG模型組和鼻粘膜耐受組所有成模大鼠，于第71-80天在兩組經(jīng)鼻腔分別滴注PB

3、S液和Rα97-116（V108A）肽段。耐受日起每日記錄體重變化，隔日記錄兩組臨床評分，第81天結(jié)束觀察，取大鼠胸腺運用TUNNEL法計數(shù)凋亡細胞數(shù)，并采用免疫組化技術(shù)（IHC）觀察Caspases-9和Caspases-3在胸腺的表達情況，ELISA測定血漿中AchR-Ab(IgG)含量。
　　 結(jié)果：
　　 1，造模Lewis大鼠中73.3％Lennon臨床評分>1分，3Hz、5Hz低頻重復神經(jīng)電刺激電衰減反應(yīng)D5

4、波幅比D1波幅遞減>10％，血漿中AchR-Ab IgG滴度與正常對照組血清比值>2.1。驗證EAMG模型成模率達73.3％。
　　 2，經(jīng)Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受治療10天后，耐受組大鼠體重較模型組鼠明顯增加，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　 3，耐受治療10天后，耐受組、模型組兩組平均Lennon臨床評分分別為1.62±0.39、2.12±0.06（P<0.05）。
　　 4，Rα9

5、7-116(V108A)鼻粘膜耐受治療10天后，耐受組AchR-Ab IgG（0.98±0.17）含量明顯下降，與模型組（1.27±0.22）比較有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　 5，模型組大鼠胸腺細胞凋亡細胞數(shù)較正常組顯著減少（P<0.05），耐受組大鼠胸腺細胞凋亡細胞數(shù)則較模型組明顯增加（P<0.05），而與正常組相比較無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。
　　 6，模型組大鼠胸腺細胞Caspases-9和Caspas

6、es-3分子表達較正常組顯著下調(diào)（P<0.05）。
　　 7，耐受組大鼠胸腺細胞Caspases-9和Caspases-3分子表達較EAMG模型組顯著增加（P<0.05）而與正常組相比較，差異無顯著性（p>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1，胸腺細胞的凋亡障礙可能是EAMG的發(fā)病機制之一；Caspases-9和Caspases-3蛋白的表達在介導EAMG大鼠胸腺細胞凋亡障礙的過程中可能具有重要作用。