實驗性自身免疫性重癥肌無力免疫耐受機制異常的研究.pdf

1、本文主要從以下四個部分展開論述：
　　第一部分 實驗性重癥肌無力小鼠模型的研究
　　目的：采用純化乙酰膽堿受體(acetylcholine receptors,AChR)免疫小鼠以建立實驗性自身免疫性重癥肌無力(experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)動物模型。
　　方法:用親和層析法從電鰩電器官中提取和純化AChR,并用其免疫C57BL/6小鼠,觀察接種動物的臨床

2、癥狀,重復神經電刺激、血清乙酰膽堿受體抗體(AChRab)水平以及電鏡下神經肌肉接頭的情況。根據臨床癥狀及重復電刺激試驗結果將造模小鼠分為成模組及未成模組,并與弗氏佐劑對照組及正常對照組比較。
　　結果:與未成模組、弗氏佐劑對照組及正常對照組相比,成模組小鼠表現出肌力減弱的癥狀,重復神經電刺激(repetitive nerve stimulation,RNS)復合動作電位波幅幅度顯著下降,發(fā)病小鼠血清抗體水平明顯升高(P<0.01

3、),電鏡證實神經肌接頭處突觸后膜變平、皺褶減少。造模成功率為55％。
　　結論:用電鰩電器官提純乙酰膽堿受體(TAChR)作為免疫原,能成功誘導產生EAMG小鼠模型。
　　第二部分 EAMG模型小鼠免疫功能狀態(tài)的改變
　　目的:探討EAMG模型小鼠免疫應答特點。
　　方法:根據臨床癥狀及重復電刺激試驗結果將造模小鼠分為成模組及未成模組,檢測其免疫功能狀態(tài)的改變,包括血清中AchRab的水平,脾臟CD4+T細胞數量

4、,用淋巴細胞增殖試驗檢測脾細胞經刀豆蛋白A(ConA)活化的非特異增殖能力,檢測脾臟T細胞細胞因子白細胞介素4(IL-4),干擾素γ(IFN-γ)分泌水平。并與弗氏佐劑(CFA)對照組及正常對照組進行比較。
　　結果:與未成模組、弗氏佐劑對照組及正常對照組相比,成模組小鼠自身抗體AchRab顯著增高,脾臟CD4+T細胞數升高;外周脾細胞對ConA刺激的非特異性增殖能力顯著升高;脾臟T細胞細胞因子IL-4,IFN-γ顯著升高,均為P

5、<0.01,IFN-γ升高的程度高于IL-4(P<0.01)。
　　結論:EAMG發(fā)生是一個自身免疫應答參與的過程,體液免疫、細胞免疫應答參與了實驗性自身免疫性重癥肌無力的發(fā)生。
　　第三部分 EAMG模型小鼠外周免疫耐受異常的研究
　　目的:探討EAMG模型小鼠外周免疫耐受機制異常在疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　方法:檢測成模組小鼠CD4+脾細胞中CD4+CD25+T細胞(Treg)水平,脾細胞Foxp3 mR

6、NA的表達情況,并與未成模組、弗氏佐劑組及正常對照組進行比較。
　　結果:與未成模組、弗氏佐劑對照組及正常對照組相比,成模組小鼠CD4+脾細胞內Treg的水平明顯下降(P<0.01),脾細胞Foxp3 mRNA的表達降低(P<0.01)。
　　結論:EAMG小鼠模型存在外周耐受缺陷,FoxP3基因通過影響Treg的數量和功能在EAMG的發(fā)病中起了作用。
　　第四部分 EAMG模型小鼠中樞免疫耐受異常的研究
　　目

7、的:探討EAMG模型鼠中樞免疫耐受機制異常在疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用
　　方法:檢測成模組小鼠胸腺內Treg水平,胸腺細胞增殖能力,胸腺細胞因子分泌水平,胸腺內乙酰膽堿受體α1亞基基因表達水平,胸腺內AIRE的基因表達水平,并與未成模組、弗氏佐劑對照組及正常對照組進行比較。
　　結果:與未成模組、弗氏佐劑對照組及正常對照組相比,成模組小鼠胸腺內CD4+T細胞水平不變(P>0.05),而胸腺內Treg相對于CD4+細胞水平卻明顯