Rα97-116（V108A）鼻粘膜耐受對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力的影響.pdf

1、目的： 1．研究鼠源乙酰膽堿受體抗體α亞基97-116(Rα97-116)誘導(dǎo)建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)動(dòng)物模型的可能性，為MG的基礎(chǔ)研究提供簡便實(shí)用的動(dòng)物模型。 2．研究Rα97-116誘導(dǎo)的實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力(EAMG)Lewis鼠外周血CD28∶CTLA4/B7表達(dá)水平，探討CD28∶CTLA4/B7在重癥肌無力(MG)免疫病因機(jī)制中的作用。 3．研究Rα97-116(V108A)鼻

2、粘膜耐受對(duì)EAMG臨床及免疫功能的影響。 方法： 采用人工合成的Rα97-116肽段與完全氟氏佐劑(CFA)充分乳化后多點(diǎn)皮下注入6-8周齡雌性Lewis鼠，并在第30、60天強(qiáng)化注射與不完全氟氏佐劑(IFA)充分混合后的等量肽段構(gòu)建EAMG鼠模型。對(duì)照組同期注入等量的磷酸鹽緩沖液(PBS)。通過觀察實(shí)驗(yàn)鼠體重變化，并進(jìn)行Lennon臨床評(píng)分；通過低頻重復(fù)電刺激檢查電衰減反應(yīng)和ELISA法檢測(cè)血清AchR-Ab滴度變化來

3、確定EAMG是否成模。并于第三次免疫后第5天，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)EAMG組和對(duì)照組CD28、B7-2、B7-1、CTLA-4在外周血、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞中的表達(dá)；第三次免疫Lewis鼠8天后，將22只成模的EAMG Lewis鼠隨機(jī)分成耐受組和對(duì)照組，分別經(jīng)鼻粘膜給與Rα97-116(V108A)和PBS緩沖液免疫耐受處理10天后，觀察不同時(shí)間點(diǎn)二組Lewis鼠體質(zhì)量、Lennon肌無力評(píng)分、血清AchR-Ab及CD28∶CTLA4/B

4、7共刺激分子變化。 結(jié)果： 1.EAMG組中75％Lewis鼠Lennon臨床評(píng)分在1級(jí)以上，3、5 Hz低頻重復(fù)電刺激陽性電衰減反應(yīng)D5>10％及血清AchR-Ab滴度與正常對(duì)照血清比值>2.1。證實(shí)了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物EAMG成模率達(dá)75％。 2. 與對(duì)照組比較，EAMG組外周血CD28、B7-2 B7-1、CTLA-4分子的表達(dá)水平均增加(p<0.05)。 3.EAMG組中CD28、CTLA-4主要在淋巴細(xì)胞

5、表達(dá)增加，其與對(duì)照組比較有顯著差異性(p<0.05、0.01)，而在單核細(xì)胞表達(dá)雖有增高，但與對(duì)照組比較無顯著差異性(p>0.05)；B7-1、B7-2在淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞表達(dá)均增加，兩組比較具有顯著差異性(p<0.01、0.05)。 4.經(jīng)Ra97-116(V108A)鼻粘膜耐受治療后第20天，治療組EAMG大鼠體重較對(duì)照組鼠明顯增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 5.EAMG大鼠經(jīng)Rα97-116(V108A)鼻

6、粘膜耐受治療后第10天，治療組臨床評(píng)分下降，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 6.Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受治療后第16天，治療組AchR-AblgG(0.97±0.20)含量明顯下降，與對(duì)照組(1.27±0.26)比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。 7.Rα97-116(V108A)鼻粘膜耐受治療后第10天，治療組CD28、CTLA4、B7-1、B7-2表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)明顯下降，與對(duì)照組比較有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義(p≤0.01)。 結(jié)論： 1.用人工合成鼠源肽段Rα97-116免疫Lewis鼠可成功誘導(dǎo)EAMG模型，成模率約75％。該實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型為MG的基礎(chǔ)研究奠定了基礎(chǔ)。 2.EAMG大鼠存在CD28∶CTLA4/B7共刺激分子表達(dá)異常，CD28∶CTLA4/B7共刺激通路異常反映了機(jī)體免疫狀態(tài)，可能參與了EAMG的發(fā)生和發(fā)展具有密切的關(guān)系。 3.Ra97-116(V108A)鼻粘膜耐受能明顯改善EAM