抗乙酰膽堿3受體抗體在干燥綜合征中的臨床意義.pdf

1、背景 干燥綜合征(Sjogren syndrome)常見于中年女性，是主要累及全身外分泌腺的慢性進(jìn)展性自身免疫病。其外分泌腺受累以唾液腺和淚腺為主，此外還可累及呼吸、消化、腎臟、神經(jīng)等多個(gè)系統(tǒng)。干燥綜合征外分泌腺的損傷機(jī)制多樣，包括淋巴細(xì)胞大量或灶性浸潤(rùn)導(dǎo)致正常腺體結(jié)構(gòu)的破壞，以及某些抗體所介導(dǎo)的外分泌腺功能異常等。本研究通過檢測(cè)抗乙酰膽堿3受體(M3R)抗體在干燥綜合征患者血清中的陽(yáng)性率，分析其與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性，探討其可能的

2、臨床應(yīng)用價(jià)值。并利用動(dòng)物模型研究抗M3R抗體對(duì)唾液流率的影響，初步探討該抗體的致病性。 目的： 分別建立酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)和免疫印跡法(western blot)檢測(cè)抗M3R抗體在干燥綜合征、系統(tǒng)性紅斑狼瘡和健康對(duì)照中的陽(yáng)性率；分析抗M3R抗體在干燥綜合征中的臨床意義；通過大鼠模型驗(yàn)證抗M3R抗體抑制唾液腺分泌的作用。 方法： 實(shí)驗(yàn)對(duì)象：自2005年～2007年于北京協(xié)和醫(yī)院入組國(guó)際干燥綜合征登

3、記網(wǎng)絡(luò)研究(SICCA)證實(shí)為肯定的干燥綜合征患者共70例作為實(shí)驗(yàn)組；同期住院診治的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者且除外繼發(fā)性干燥綜合征共49例作為疾病對(duì)照組；并以同期健康獻(xiàn)血者共76例作為健康對(duì)照組。三組間年齡、性別匹配。 實(shí)驗(yàn)方法：以重組的M3R受體為抗原通過ELISA法檢測(cè)三組血清中抗M3R抗體，以健康對(duì)照組吸光度的-X+SD為陽(yáng)性界定，計(jì)算SS組和SLE組的抗M3R抗體陽(yáng)性率；并以重組的的抗原用Western法進(jìn)一步驗(yàn)證E

4、LISA法檢測(cè)的可靠性；分析SS組中抗M3R抗體陽(yáng)性患者較陰性患者在Schirmer試驗(yàn)、BUT、角膜染色、結(jié)膜染色、五分鐘唾液流率、下唇小唇腺灶性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)指數(shù)、RF、IgG、抗SSA抗體陽(yáng)性例數(shù)、抗SSB抗體陽(yáng)性例數(shù)間的差異。用親和層析法純化抗M3R抗體陽(yáng)性患者血清中的IgG型抗M3R抗體，以15mg/kg的劑量(7.6mg/ml)注射大鼠尾靜脈觀察大鼠唾液腺流率的改變，陰性對(duì)照用相同濃度和劑量的人IVIG，陽(yáng)性對(duì)照用阿托品(0.

5、125mg/kg)。 結(jié)果： (1)ELISA法檢測(cè)76例健康組的-X+sD的值為0.1710+0.0723，以此為陽(yáng)性界定值計(jì)算出SS患者的抗M3R抗體的陽(yáng)性率為47.1096(33/70)，SLE患者組中抗M3R抗體的陽(yáng)性率為4.02％(2/49)，健康對(duì)照組中抗M3R抗體的陽(yáng)性率為14.47％(11/76)；抗M3R抗體在SS患者中的陽(yáng)性率明顯高于SLE組(47.10％vs 4.02％，p<0.05)健康對(duì)照組(4

6、7.10％ vs 14.47％，P<0.05)，其間有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。而SLE組和健康對(duì)照組間的抗M3R抗體陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(4.02％ vs 14.47％，P>0.05)。 (2)Western法檢測(cè)出SS患者的抗M3R抗體的陽(yáng)性率為60.00％(42/70)，SLE組中的抗M3R抗體的陽(yáng)性率則為12.20％(6/49)，健康對(duì)照組中抗M3R抗體的陽(yáng)性率為15.79％(12/76)；抗M3R抗體在SS患者中的陽(yáng)性率明顯高于S

7、LE組(60.00％vs12.20％，p<0.05)和健康對(duì)照組(60.00％vs 15.79％，p<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。而SLE組和健康對(duì)照組間的抗M3R抗體陽(yáng)性率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(12.20％vs15.79％，P>0.05)。Western法和ELISA法的符合率達(dá)74.9％。 (3)SS組中抗M3R抗體陽(yáng)性患者IgG(39.97 vs 29.64，p<0.05)、RF值(42.23vs 27.92，p<0.05)及抗

8、SSB抗體陽(yáng)性例數(shù)(31 vs 9，p<0.05)較陰性患者明顯增高，其間有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。而抗M3R抗體陽(yáng)性組與陰性組相比，唇腺活檢陽(yáng)性率、Schirmer試驗(yàn)、BUT、五分鐘唾液流率、角膜染色和結(jié)膜染色間無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但是抗M3R抗體陽(yáng)性組的患者唇腺活檢中淋巴細(xì)胞灶性浸潤(rùn)>3的患者例數(shù)較陰性組明顯為高(27 vs 10)，p<0.05。 (4)以親和層析柱純化的含抗M3R抗體的人血清IgG(實(shí)驗(yàn)組，劑量按15mg/kg，

9、濃度為7.6mg/ml)注射大鼠尾靜脈后可減少大鼠的唾液流率(0.0938g vs 0.0748g，P>0.05)，阿托品組(陽(yáng)性對(duì)照組)用藥后唾液流率較用藥前顯著減少(0.09327g vs0.02198g，P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組與陽(yáng)性對(duì)照組相比，減少的差值無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(-0.02227g vs -0.07128g，P>0.05)。正常人IVIG組(陰性對(duì)照組)用藥后唾液流率較用藥前顯著增加(0.08230g vs 0.43425

10、g，P<0.05)。比較實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組用藥后與用藥前唾液流率改變的差值，兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(-0.02227gvs0.35195g，P<0.05)。 結(jié)論： (1)ELISA和Western法檢測(cè)SS患者抗M3R抗體陽(yáng)性率明顯高于SLE患者和健康對(duì)照者。 (2)SS患者中抗M3R抗體陽(yáng)性組較陰性組IgG值、RF值、抗SSB抗體陽(yáng)性例數(shù)以及下唇小唇腺淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為高。 (3)純化的含抗M3R抗體的