乙酰膽堿及M型乙酰膽堿受體在膿毒癥大鼠心肌損傷中的作用研究.pdf

1、目的:
　　通過盲腸結(jié)扎穿孔法（CLP）建立SD大鼠膿毒癥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，探討乙酰膽堿及M型乙酰膽堿受體在膿毒癥6h大鼠心肌損傷中的水平變化及作用，從而為臨床膿毒癥伴發(fā)心肌損傷的患者治療提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　將36只清潔級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為3組：正常對(duì)照組（12只）、假手術(shù)組（12只）、CLP組（12只）。正常對(duì)照組：不作任何處理；假手術(shù)組：只開腹，關(guān)腹，不結(jié)扎和穿孔盲腸；CLP（膿毒癥）組：行盲腸結(jié)扎穿孔手

2、術(shù)。觀察每組大鼠一般情況：包括肛溫、心率和呼吸頻率。造模后6h留取血液標(biāo)本，并迅速取出心臟切取心室肌，作為病理形態(tài)學(xué)標(biāo)本，其余心肌組織作為檢測(cè)標(biāo)本。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附劑方法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）檢測(cè)大鼠血清肌鈣蛋白 T（cTnT）的濃度、全自動(dòng)生化儀測(cè)定肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）的濃度。將大鼠心肌組織標(biāo)本制作成組織勻漿，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附劑法檢測(cè)其中乙酰膽堿及

3、 M型乙酰膽堿受體水平的變化。將病理標(biāo)本分為兩組，一組進(jìn)行HE染色，觀察心肌組織大體病理改變；另一組制作電鏡切片，電鏡下觀察組織超微結(jié)構(gòu)的變化，并按Flameng分級(jí)方法對(duì)心肌線粒體進(jìn)行半定量評(píng)分。對(duì)測(cè)得的數(shù)據(jù)結(jié)果采用 SPSSl8.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.CLP組大鼠造模6

4、h后出現(xiàn)心率、呼吸顯著加快，體溫上升及嗜睡等不同程度的膿毒血癥表現(xiàn)。正常對(duì)照組、假手術(shù)組未見相關(guān)癥狀出現(xiàn)。
　　2.實(shí)驗(yàn)測(cè)得CLP組血清肌鈣蛋白T（cTnT）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）及乙酰膽堿濃度水平與假手術(shù)組、正常對(duì)照組比較，cTnT（7.62±0.62 vs1.34±0.21 vs1.16±0.18，P<0.05），CK-MB（1541.23±237.58 vs323.68±59.58 vs250.67

5、±45.80，P<0.05），CK（1879.45±356.80 vs358.32±67.90 vs285.78±34.79，P<0.05），Ach（678.4±99.62 vs323.23±53.50 vs318.58±44.85，P<0.05），有顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。M型乙酰膽堿受體水平（241.20±27.56 vs250.80±23.78 vs247.56±26.52，P>0.05）與假手術(shù)組及正常對(duì)照組比較無明顯變化

6、。
　　3.CLP組大鼠心肌標(biāo)本HE染色顯示心肌細(xì)胞水腫，炎癥細(xì)胞浸潤，正常對(duì)照組及假手術(shù)組未見相關(guān)病理學(xué)改變；CLP組電鏡下可見心肌線粒體腫脹、脊排列紊亂部分脊斷裂，線粒體空泡化；與正常對(duì)照組、假手術(shù)組心肌線粒體半定量評(píng)分明顯升高（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.膿毒癥6h心肌損傷標(biāo)志物血清肌鈣蛋白T（cTnT）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）濃度均升高，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
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