m2型乙酰膽堿受體在豚鼠前庭毛細(xì)胞中的表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:已有的研究已經(jīng)證實(shí)乙酰膽堿(acetylcholine,Ach)是哺乳動(dòng)物主要的內(nèi)耳傳出神經(jīng)遞質(zhì),在外周前庭系統(tǒng)中存在各種毒菌堿型乙酰膽堿受體(muscarinic acetylcholine receptor,mAChR)和煙堿型乙酰膽堿受體(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)。目前的研究表明m1-m5型乙酰膽堿受體在哺乳動(dòng)物前庭終器中均有表達(dá),但這些受體在前庭組織中的細(xì)胞定位國(guó)內(nèi)外尚

2、無報(bào)道,本實(shí)驗(yàn)研究編碼m2型乙酰膽堿受體(m2 muscarinic acetylcholine receptor,m2 mAChR)的mRNA在豚鼠前庭終器及Ⅱ型前庭毛細(xì)胞(vestibular hair cell,VHC)中的表達(dá)。
   方法:1. 從豚鼠內(nèi)耳中分離出前庭組織并提取RNA,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法

3、檢測(cè)編碼m2 mAChR的mRNA是否在豚鼠前庭組織中有表達(dá)。2. 從豚鼠前庭組織中分離出Ⅱ型前庭毛細(xì)胞,在顯微操作儀器下應(yīng)用玻璃電極捕獲單個(gè)Ⅱ型前庭毛細(xì)胞,應(yīng)用單細(xì)胞RT-PCR(single cell reverse transcription polymerase chain reaction,SC-RT-PCR)法檢測(cè)編碼m2 mAChR的mRNA是否在豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞中有表達(dá),從而明確m2 mAChR在前庭組織中的細(xì)胞定位。

4、
   結(jié)果:在豚鼠前庭終器及Ⅱ型前庭毛細(xì)胞中均可檢測(cè)到編碼m2 mAChR基因的mRNA的表達(dá),經(jīng)測(cè)序證實(shí)其與預(yù)計(jì)擴(kuò)增的cDNA序列一致。
   結(jié)論:本研究運(yùn)用RT-PCR的方法成功的檢測(cè)出編碼m2 mAChR基因的mRNA在豚鼠前庭終器中的表達(dá),并進(jìn)一步運(yùn)用單細(xì)胞RT-PCR的方法檢測(cè)編碼m2 mAChR的mRNA在豚鼠VHCs Ⅱ中的表達(dá),由此為m2 mAChR在豚鼠VHCs Ⅱ中的存在提供證據(jù),并證實(shí)m2 mA

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