大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體保護(hù)缺血心肌的實驗研究.pdf

1、背景：對缺血心肌的保護(hù)研究一直是心臟學(xué)科領(lǐng)域的重點。中藥以其副作用少，多靶點起效獨具優(yōu)勢。脂質(zhì)體是理想的載藥體系，把對缺血心肌有保護(hù)作用的中藥與脂質(zhì)體結(jié)合可望產(chǎn)生更好的療效。 目的：研制大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體，考察其保護(hù)缺血心肌的效果，探討其保護(hù)缺血心肌的機(jī)制。 方法： 1制劑部分： ①脂質(zhì)體的制備：用反相蒸發(fā)法制備大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體和大蒜素脂質(zhì)體兩種制劑，用離心法測定脂質(zhì)體的包封率，用透射電鏡觀察其形態(tài)，用

2、動態(tài)激光散射法測其粒徑和粒度分布，并對其穩(wěn)定性作3個月觀察。 ②考察刺激性：大白兔9只，隨機(jī)分為3組，分別是大蒜素注射液組、大蒜素脂質(zhì)體組和大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組。各組從左側(cè)耳緣靜脈、股四頭肌注射或從左側(cè)眼結(jié)膜表面滴注上述藥物，用同樣方法在右側(cè)給予生理鹽水作對照，觀察三種制劑在末次給藥10、30、60、120min、24、48h后對局部血管、肌肉、粘膜的刺激性，并作病理切片。 ③測定藥物在缺血再灌注大鼠體內(nèi)的血漿濃度和心肌

3、組織濃度：SD大鼠18只，隨機(jī)分為3組，分別是大蒜素注射液組、大蒜素脂質(zhì)體組和大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組。各組均結(jié)扎冠脈左前降支30min，復(fù)灌3h，造成缺血再灌注模型。在復(fù)灌前15min經(jīng)靜脈注射藥物，復(fù)灌3h后取血和左室前壁心肌組織，用反相高效液相色譜法檢測血漿和心肌勻漿中大蒜素的濃度。 2藥效學(xué)部分： ①對心肌梗死范圍的影響：SD大鼠48只，隨機(jī)分為6組，分別是假手術(shù)組、缺血再灌注模型組、倍他洛克組、大蒜素注射液組、大蒜

4、素脂質(zhì)體組和大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組。除假手術(shù)組外，其余各組均結(jié)扎冠脈左前降支30min，復(fù)灌3h，造成缺血再灌注模型。在復(fù)灌前15min，經(jīng)靜脈注射藥物，假手術(shù)組和模型組注射生理鹽水作對照。觀察心肌梗死范圍(梗死區(qū)面積占危險區(qū)面積的百分比)情況。 ②對缺血再灌注心肌形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響：分別在光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下對缺血心肌的一般病理改變和超微形態(tài)結(jié)構(gòu)改變進(jìn)行觀察。 3作用機(jī)制部分： ①生化機(jī)制：SD大鼠48只，隨機(jī)分

5、為6組，分組及給藥操作同上。復(fù)灌3h后取血和左室前壁心肌組織，檢測血漿CK、MDA、SOD、ET及心肌勻漿MPO、MDA、SOD含量。 ②心肌微循環(huán)：SD大鼠36只，隨機(jī)分為6組，分組及給藥操作同上。用可視分光組織氧飽和度監(jiān)測器探測結(jié)扎冠脈左前降支前、結(jié)扎后10min、25min、復(fù)灌后5min、3h共5個時點心肌氧飽和度的變化。 結(jié)果： 1制劑部分： ①制備的大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體的包封率為84.57％，平

6、均粒徑為103.9nm，電鏡觀察呈圓形和橢圓形，4℃放置3月無聚集或沉淀；大蒜素脂質(zhì)體的包封率為87.19％，平均粒徑為114.8nm，電鏡觀察呈圓形和橢圓形，常溫下放置3月出現(xiàn)沉淀，4℃放置3月無聚集或沉淀。 ②靜脈注射后，大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體、大蒜素脂質(zhì)體、大蒜素注射液分別使1只、2只、3只兔耳緣靜脈出現(xiàn)充血現(xiàn)象，恢復(fù)正常時間分別為10min、10min、60min；肌肉注射后，均未見明顯異常；滴眼后三者刺激反應(yīng)評分分別為1.

7、3分、2分、4分，恢復(fù)正常時間分別為60min、120min、30min。兔耳病理片結(jié)果示大蒜素注射液對照組兔耳緣靜脈充盈，組織間隙水腫，血管壁及周圍有白細(xì)胞浸潤，而大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組及大蒜素脂質(zhì)體組無明顯異常。 ③靜脈注射3.25h后，大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組、大蒜素脂質(zhì)體組、大蒜素注射液組的血藥濃度分別是2.94、0.09、0.07μg/ml；在心肌組織中的藥物濃度未檢出。 2藥效學(xué)部分： ①缺血再灌注損傷使模

8、型組心肌梗死區(qū)面積占危險區(qū)面積的百分比達(dá)65.50±11.79％，給予藥物后該百分比下降了15.67～25％(P＜0.05或P＜0.01)，其中大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組下降了19.7％(P＜0.01)，藥物組之間無顯著性差異(P＞0.05)； ②光鏡觀察，缺血再灌注模型組梗死心肌范圍大，毛細(xì)血管膜結(jié)構(gòu)破壞，心肌組織間有大量中性粒細(xì)胞浸潤。大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組梗死心肌范圍明顯縮小，毛細(xì)血管膜結(jié)構(gòu)清晰，心肌組織間見少量中性粒細(xì)胞浸潤；電

9、鏡觀察，缺血再灌注模型組缺血心肌細(xì)胞線粒體腫脹，嵴減少或消失，排列紊亂，肌絲斷裂，Z線模糊，血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，突向管腔內(nèi)，管腔外可見到中性粒細(xì)胞浸潤；大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組缺血心肌細(xì)胞線粒體排列規(guī)則，部分線粒體輕度腫脹，嵴完整，肌絲結(jié)構(gòu)清晰，Z線清晰，血管內(nèi)皮細(xì)胞無腫脹，管腔外未見中性粒細(xì)胞浸潤。 3作用機(jī)制部分： ①同缺血再灌注模型組比較，大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組心肌MPO、MDA水平降低了17.20％(P＜0.01)和50

10、.48％(P＜0.05)；血漿CK、MDA水平降低了26.07％和37.24％(P＜0.01)。 ②同缺血再灌注模型組比較，大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體組心肌氧飽和度在缺血期不隨缺血時間延長而降低。 結(jié)論： 1成功制備出大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體和大蒜素脂質(zhì)體兩種制劑，它們對血管和粘膜的刺激性較注射液減輕；大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體能顯著提高藥物在缺血再灌注大鼠體內(nèi)的血漿濃度，延長藥物在血循環(huán)中的時間。 2大蒜素長循環(huán)脂質(zhì)體能縮小