大蒜素對寒凝血瘀心肌缺血氣體信號分子調控及微循環(huán)影響的研究.pdf

1、背景：冠心病心絞痛、急性心肌梗死(AMI)是臨床最常見的心肌缺血性疾病，均屬于中醫(yī)血瘀證范疇。寒凝血瘀是缺血性心臟病臨床常見的中醫(yī)證型，前期臨床研究表明，大蒜素能夠作用于冠心病心絞痛的多個發(fā)病環(huán)節(jié)，具有中藥多靶點起效的特性，對缺血心肌有良好的保護作用，尤其對寒證的治療作用明顯優(yōu)于熱證。大蒜素對寒凝血瘀證的治療作用與歷代文獻記載的大蒜具有溫通活血作用頗為一致，提示大蒜素也可能具有溫通活血的作用，發(fā)揮對寒凝血瘀心肌缺血的治療作用。

2、目的：探討大蒜素對寒凝血瘀心肌缺血的作用機制，從大蒜素對氣體信號分子調控和對微循環(huán)的改善，揭示大蒜素溫通活血治療寒凝血瘀心肌缺血的病理生理及藥理機制，并對血瘀證和寒凝血瘀心肌缺血患者的微循環(huán)進行觀測。 方法：本研究分為理論探討、實驗研究和臨床研究三大部分。 (1)理論探討：圍繞研究目的，從寒凝血瘀心肌缺血的證治研究、氣體信號分子與活血化瘀研究、冠脈微循環(huán)障礙的中西醫(yī)結合研究三方面進行了理論探討。 (2)實驗研究：

3、 ①首先采用間斷反復冷應激和垂體后葉素(Pit)聯(lián)合造模的方法，建立了大鼠寒凝血瘀心肌缺血病證結合模型：將大鼠分別裝入籠內，置于-5℃±1℃環(huán)境中，連續(xù)3h，使大鼠全身暴露于低溫環(huán)境。然后將大鼠取出，恢復20℃±1℃室溫，并給予Pit20U/kg/d腹腔注射，連續(xù)3天。造模第3天，大鼠寒凝血瘀心肌缺血模型造模成功。同時，從大鼠外觀狀況、體溫、舌耳微循環(huán)血氧飽和度(StO<,2>)、心電圖、血液生化指標、心肌病理、染色等方面對模型

4、進行了綜合評價。 ②在大鼠寒凝血瘀心肌缺血動物模型的基礎上，觀察了大蒜素對寒凝血瘀心肌缺血的一般生理指標(證候、體溫、心電圖)、生化指標(FT<,3>、FT<,4>、TSH、cTnT、MDA、SOD)、血管舒縮活性肽(CGRP、ET)、心肌病理的作用。 ③從大蒜素對氣體信號分子NO、NOS、H<,2>S和對心肌eNOS、ET-1mRNA表達的影響，研究了大蒜素對寒凝血瘀心肌缺血的氣體信號分子調控機制。 ④從可視光

5、微循環(huán)StO<,2>、微血管內皮細胞Caveolin-1、CD34、心肌毛細血管超微結構，研究了大蒜素對寒凝血瘀心肌缺血微循環(huán)的影響。 (3)臨床研究： ①通過對健康成人篩查，取得舌、面部可視光StO<,2>正常值，并測定血瘀證患者活血化瘀治療前后的舌、面部可視光StO<,2>，對血瘀證的微循環(huán)功能進行了臨床研究。 ②通過對急診PCI及溶栓治療后的急性期AMI患者進行超聲心動圖和MCE檢查，評價心肌微循環(huán)，觀測寒

6、凝血瘀心肌缺血的心肌微循環(huán)特點。 結果： (1)大鼠外觀狀況觀察評價，符合中醫(yī)寒凝血瘀證候表現(xiàn)：耳溫和肛溫降低分別反映了寒冷因素對外周和內部體溫的影響；耳、舌StO<,2>降低表明外周微循環(huán)的功能減退；心電圖J點的變化可判斷心肌缺血模型的成立；心臟StO<,2>降低表明心肌微循環(huán)功能受損；心率的減慢、血清FT<,3>、FT<,4>、TSH的降低反映了寒的征象；血漿ET的增高反映了血管痙攣、血瘀的情況；心肌組織病理切片、染

7、色證實了模型心肌缺血、壞死的存在。應用具有熱性藥屬性的抗心肌缺血藥硝酸甘油治療進行反證，顯著改善了各項指標，驗證了模型的寒凝血瘀心肌缺血診斷。綜合上述各項指標，可以確定采用間斷反復冷應激和Pit聯(lián)合造模的方法建立的大鼠寒凝血瘀心肌缺血病證結合模型成立，符合中醫(yī)理論。 (2)大蒜素對寒凝血瘀心肌缺血的一般指標、生化指標、血管舒縮活性肽調節(jié)、心肌病理均有改善作用：低劑量大蒜素可明顯減少寒凝血瘀心肌缺血大鼠心肌中MDA含量，增加SOD

8、活力。 (3)在對氣體信號分子調控機制方面，大蒜素低劑量明顯能上調eNOSmRNA表達，促進eNOS的合成，顯著提高大鼠心肌組織NOS、NO含量；中劑量能顯著提高血漿H,S含量，降低心肌組織H2S合酶含量。 (4)在微循環(huán)方面，大蒜素中、低劑量能顯著提高寒凝血瘀心肌缺血大鼠的耳、舌、心臟StO<,2>，大蒜素中劑量能顯著降低Caveolin-1的表達，增加CD34的表達，減輕心肌超微結構病變程度，有改善微循環(huán)的作用。

9、 (5)臨床研究表明，可視光StO<,2>面部最低，口唇最高；舌各部位的StO<,2>值以舌面最高，活血化瘀治療后各部位StO<,2>明顯增高。 (6)超聲心動檢查寒凝血瘀證患者對負荷試驗的反映更明顯，MCE心尖K值顯著低于非寒凝血瘀證。 結論： (1)間斷反復冷應激和Pit聯(lián)合造模的方法建立的大鼠寒凝血瘀心肌缺血模型符合中醫(yī)證候特點。 (2)大蒜素具有多重作用機制，能針對寒凝血瘀心肌缺血的多個發(fā)病環(huán)

10、節(jié)，通過調控氣體信號分子和改善微循環(huán)，多層面發(fā)揮對缺血心肌的保護作用，以中、低劑量作用最佳。 ①大蒜素能提高心肌組織抗氧化能力，保護缺血心?。和ㄟ^調控血管活性肽CGRP、ET的作用，拮抗由于造模因素所致的冠脈痙攣收縮，舒張血管，改善心電圖J點變化，降低aTnT，減輕心肌缺血損傷。 ②大蒜素對寒凝血瘀心肌缺血的氣體信號分子調控機制是：通過上調eNOSmRNA表達，下調ET-1mRNA表達，升高NOS，促進NO的釋放，同時下

11、調H<,2>S，多方面發(fā)揮對缺血心肌的保護作用。 ③大蒜素對寒凝血瘀心肌缺血的心肌微循環(huán)具有改善作用：能增加心肌組織毛細血管數(shù)量，作用于微血管內皮細胞的Caveolin-1，升高外周耳、舌和心肌組織的StO<,2>，維持心肌氧供和氧利用，改善微循環(huán)功能。 (3)可視光StO<,2>測定是一種新的定量評價組織微循環(huán)功能的指標，對血瘀證舌、面部望診的客觀化研究有重要價值。 (4)AMI患者介入治療后MCE檢測，寒凝血