過表達IL-37b基因?qū)︻愶L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞增殖的影響.pdf

1、目的:研究白細胞介素-37b(interleukin-37b，IL-37b)基因過表達對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)增殖的影響及其機制。
　　方法:將攜帶有目的基因IL-37b的重組質(zhì)粒用脂質(zhì)體法導(dǎo)入體外培養(yǎng)的RA-FLS中，Cell Counting Kit-8（CCK-8）法檢測細胞增殖能力，分別采用PI染色法

2、和Annexin V-FITC/PI雙染色法,通過流式細胞術(shù)檢測細胞周期及凋亡；RT-PCR和Western Blot分別從基因水平和蛋白水平來檢測 IL-37b、Bcl-2及 Caspase-3的表達，以未轉(zhuǎn)染的RA-FLS及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的RA-FLS作為陰性對照及空載體對照。采用t檢驗進行統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果:①熒光顯微鏡下觀察結(jié)果顯示攜帶有 IL-37b基因的重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染RA-FLS。②CCK-8檢測結(jié)果顯示，IL-37b

3、重組質(zhì)粒組轉(zhuǎn)染后24h、48h、72 h，OD值分別較未轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒對照組顯著降低（P<0.01），而未轉(zhuǎn)染組與空質(zhì)粒對照組OD值無明顯差異。③流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，IL-37b重組質(zhì)粒組處于S+G2期細胞比例（25.46±1.86）％較未轉(zhuǎn)染組(33.52±1.93)%及空質(zhì)粒對照組(32.25±0.79)%減少（P<0.01），IL-37b重組質(zhì)粒組處于G1期細胞比例（74.54±2.12）%較未轉(zhuǎn)染組（66.48±0.88）%

4、及空質(zhì)粒對照組（67.75±2.01）%增加（P<0.01）。④IL-37b重組質(zhì)粒組細胞凋亡率（27.45±1.76）%較未轉(zhuǎn)染組（5.25±0.43）%及空質(zhì)粒對照組（6.23±0.79）%升高（P<0.01）。⑤RT-PCR和Western Blot檢測結(jié)果顯示IL-37b重組質(zhì)粒組的Bcl-2的表達較未轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒對照組顯著減少（P<0.05）,而Caspase-3的表達較未轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒對照組顯著增高（P<0.01）。