hTRAIL對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、背景：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis, RA)RA的病理特征主要表現(xiàn)為滑膜細(xì)胞的增殖與炎性細(xì)胞的浸潤，導(dǎo)致滑膜增厚、骨與軟骨組織的侵蝕破壞。越來越多的研究表明，RA滑膜成纖維細(xì)胞（rheumatoid arthritis synovial fibroblasts, RASFs）的凋亡缺陷是其重要發(fā)病機(jī)制之一。因此誘導(dǎo)RASFs凋亡、抑制滑膜組織增殖成為治療RA的關(guān)鍵。腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-rel

2、ated apoptosis inducing ligand, TRAIL)是近年來新發(fā)現(xiàn)的凋亡誘導(dǎo)配體，它具有強(qiáng)大的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的能力，但對正常細(xì)胞基本沒有影響。有研究發(fā)現(xiàn)，在IL-1β誘導(dǎo)的兔膝骨關(guān)節(jié)炎模型中，通過對兔關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入帶有TRAIL基因的腺病毒可使TRAIL介導(dǎo)的炎性滑膜組織凋亡率升高。本實驗擬通過重組人腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（human TNF-related apoptosis inducing ligan

3、d,hTRAIL）蛋白體外誘導(dǎo)RASFs的凋亡，以期尋找RA新的治療方法。
　　目的：探討重組hTRAIL蛋白對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞（RASFs）凋亡的作用。
　　方法：
　　1.獲取類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜組織，用酶消化法分離培養(yǎng)原代滑膜細(xì)胞。
　　2.滑膜細(xì)胞的鑒定：滑膜細(xì)胞傳至第4代，倒置顯微鏡下觀察滑膜細(xì)胞形態(tài)， II型膠原鑒定滑膜成纖維細(xì)胞。
　　3.細(xì)胞增殖實驗：不同終濃度hTRAIL干預(yù)滑

4、膜細(xì)胞，繼續(xù)培養(yǎng)不同時間后， MTT法檢測其對滑膜細(xì)胞增殖的抑制作用。
　　4.流式細(xì)胞術(shù)：設(shè)對照組（僅加培養(yǎng)基）和加藥組（加入含不同濃度hTRAIL的含藥培養(yǎng)基），干預(yù)對數(shù)生長期細(xì)胞4小時后,收集細(xì)胞，上機(jī)檢測滑膜細(xì)胞的凋亡情況。實驗重復(fù)三次取平均值。
　　5. RT-PCR：設(shè)對照組（僅加培養(yǎng)基）和加藥組（加入含不同濃度hTRAIL的含藥培養(yǎng)基），干預(yù)對數(shù)生長期細(xì)胞4小時后,進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈（RT-PCR）反應(yīng)，軟件

5、分析結(jié)果。實驗重復(fù)三次，取平均值。
　　6. Western bloting：hTRAIL干預(yù)對數(shù)生長期細(xì)胞4小時后,進(jìn)行Western bloting實驗，用凝膠圖像處理系統(tǒng)分析實驗結(jié)果。實驗重復(fù)三次，取平均值。
　　結(jié)果：
　　1. hTRAIL對滑膜細(xì)胞生長的影響：用不同濃度的hTRAIL處理滑膜細(xì)胞4h、12h、24h、48h后，表現(xiàn)出不同程度的細(xì)胞生長抑制作用，各組與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01