白藜蘆醇對TNF-α誘導人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞增殖的影響和調(diào)節(jié)Wnt信號通路的研究.pdf

1、背景:
　　類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)作為彌漫性結締組織疾病之一，已成為世界范圍內(nèi)的健康問題，嚴重影響病人及其家人的生活質(zhì)量及身心健康。RA是一種慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病，主要以關節(jié)滑膜為主要靶組織。介導關節(jié)破壞的主要細胞為成纖維樣滑膜細胞，主要病理表現(xiàn)為滑膜組織異常增殖、滑膜下層炎癥侵潤，滑膜炎可引起關節(jié)中骨與軟骨的持續(xù)損害，RA發(fā)病機制至今尚未完全明確。RA的發(fā)病與多種細胞因子相關，腫瘤壞死

2、因子-α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）是其中重要參與因子之一。目前，對RA的主要研究集中于滑膜細胞中異常的信號途徑，Wnt信號通路在多種細胞增殖與分化方面有著關鍵調(diào)控作用，在RA滑膜炎癥以及調(diào)節(jié)骨代謝過程中起重要作用，其中Wnt/β-catenin信號通路目前研究最為詳盡，鑒于Wnt信號通路在RA的FLS中的重要調(diào)控作用，干預wnt信號轉導通路中的各個環(huán)節(jié)成為治療RA的新靶點。白藜蘆醇(resve

3、ratrol，Res)廣泛存在于虎杖、花生及葡萄等植物當中，是多酚類化合物之一，具有抗氧化、抗衰老、抗炎癥及保護心血管的作用，祖國醫(yī)學發(fā)現(xiàn)虎杖根（主要有效成分為白藜蘆醇）能治療關節(jié)的炎癥。近年研究者發(fā)現(xiàn)Res能誘導多種腫瘤細胞的凋亡，而RA中成纖維樣滑膜細胞(fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)的增殖與分化類似于腫瘤細胞的特性。就此，本課題以滑膜細胞為研究對象，研究TNF-α對成纖維樣滑膜細胞的影響，從Wn

4、t信號通路方面進一步研究白藜蘆醇對成纖維樣滑膜細胞作用可能的分子機制。
　　目的:
　　1.觀察TNF-α對人類風濕關節(jié)炎成纖維樣滑膜細胞(Human Fibroblast-likesynoviocyte of rheumatoid arthritis，HFLS-RA)增殖的影響，以及觀察不同濃度的白藜蘆醇對TNF-α誘導的HFLS-RA增殖的影響。
　　2.觀察TNF-α對HFLS-RA中Wnt信號通路的調(diào)控，以及不

5、同濃度的Res對TNF-α誘導的HFLS-RA的Wnt信號通路的影響。
　　方法:
　　1.復蘇購買的HFLS-RA細胞株后，培養(yǎng)傳代至第3-5代備用。
　　2.采用TNF-α(10μg/l)處理HFLS-RA24h后，運用CCK8法觀察TNF-α對HFLS-RA增殖的影響。
　　3.不同濃度的Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)干預HFLS-RA后再用10μg/

6、l的TNF-α刺激24h，用CCK8法測定Res對TNF-α誘導的HFLS-RA生長的影響。
　　4.將濃度為10μg/l的TNF-α加入HFLS-RA中共同孵育30min，運用Western-blot檢測其與空白對照組的sFRP4、β-catenin及C-myc蛋白的表達水平。
　　5.將不同濃度的Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)與HFLS-RA共同孵育24h后，再用1

7、0μg/l的TNF-α刺激30min，用Western-blot檢測Res對TNF-α誘導的HFLS-RA中sFRP4、β-catenin及C-myc蛋白表達的影響。
　　結果:
　　1.HFLS-RA由TNF-α誘導后，HFLS-RA增殖明顯增強，不同濃度的Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)對TNF-α誘導后的HFLS-RA增殖有抑制作用，并呈劑量依賴性。
　　2.

8、經(jīng)Western-blot檢測發(fā)現(xiàn)TNF-α誘導后的HFLS-RA與空白對照組相比較，sFRP4的表達水平降低，β-catenin及C-myc的表達水平增高。(P＜0.05)
　　3.與TNF-α組相比較，經(jīng)Western-blot方法分析顯示:不同濃度Res(50umol/l、100umol/l、200umol/l、400umol/l)組能降低TNF-α誘導后的HFLS-RA的β-catenin及C-myc的蛋白表達水平，sFR