小型豬供胰缺血損傷及其相關(guān)機理的研究.pdf

1、目的： 1、建立穩(wěn)定的小型豬同種異體胰腺移植模型； 2、觀察低溫保存對供胰功能的影響； 3、探討冷缺血損傷與供胰細胞凋亡的關(guān)系及其相關(guān)機制。 方法： 1、30只健康小型豬隨機配對，施行豬同種異體胰腺移植15次。將供胰的動、靜脈與受體腹主動脈、下腔靜脈吻合，靜脈轉(zhuǎn)流入體循環(huán)，十二指腸節(jié)段與受體空腸吻合，胰液空腸內(nèi)引流。術(shù)中監(jiān)測受體平均動脈壓、中心靜脈壓。術(shù)后給予常規(guī)補液及抗凝、抗感染，觀察記錄受體一

2、般情況，計算其存活率。 2、將40只健康小型豬隨機配對，施行豬同種異體胰腺移植20次。受體平均分為四組：1、冷缺血時間(CIT)0h組；2、冷缺血時間(CIT)3h組； 3、冷缺血時間(CIT)6h組； 4、冷缺血時間(CIT)9h組。切除受體豬胰腺制成糖尿病模型，胰腺移植完成30min后獲取供胰組織標本，標本分三套，分別用作電鏡觀察、細胞凋亡原位末端標記檢測及測定組織中HSP-70、TNF-α表達。此外，連續(xù)抽

3、取靜脈血，分別測定血糖、血淀粉酶及血清胰島素濃度。 結(jié)果： 1、共完成全胰十二指腸移植15例，存活1d以上者14例，手術(shù)成功率為93％。供體平均手術(shù)時間(69.3±7.2)min，受體平均手術(shù)時間(75.5±13.1)min。15例受體中，1例因術(shù)中失血過多，于術(shù)后2h死于循環(huán)衰竭；另l例因感染引起腸-腸吻合口瘺于術(shù)后3d死亡；其余13例于手術(shù)后第2d獲取外周血檢測血糖均正常。 2、四組供胰血流再通2h后受體豬血

4、糖開始下降，24h后趨于穩(wěn)定。于供胰移植成功后2h、8h，CIT 9h組血糖、血清淀粉酶均顯著高于其余三組(P<0.05)，且CIT 3h組和CIT 6h組顯著高于CIT 0h組 (P<0.05)，而CIT 3h組和CIT 6h組之間則無顯著差異(P>0.05)。 3、供胰血流再通后0.5h時，TUNEL(TDT介導(dǎo)dUTP 末端標記法)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各組供胰組織內(nèi)均可見散在分布的胞核染色陽性的胰腺腺泡細胞，電鏡觀察也進一步證實

5、了供胰再灌注期間組織內(nèi)存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、線粒體輕度腫脹、胞核濃縮、異染色質(zhì)增多的凋亡腺泡細胞，且低溫保存時間越長的供胰，單位面積內(nèi)陽性細胞數(shù)量越多。 定量分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，四組供胰的凋亡指數(shù)(Apoptosis index，AI)間均具有顯著差異(P<0.01)。此外，供胰血流再通后0.5h，四組供胰組織內(nèi)均可見程度不等的TNF-α表達，陽性物質(zhì)分布于細胞質(zhì)。定量分析發(fā)現(xiàn)各組間TNF-α表達均具有顯著差異(P<0.05或P<0.01)

6、，其表達程度依次為：CIT 0h組CIT 3h組>CIT 6h組>CIT 9h組，各組間HSP-70表達也具有顯著差異(P<0.05或P<0.01)。 結(jié)論： 1、采用供胰的動、靜脈與受體腹主動脈、下腔靜脈吻合，十二指腸節(jié)段與受體空腸吻合，建立豬的胰腺移植模型，該模型簡

7、單、穩(wěn)定、可靠，克服了傳統(tǒng)模型并發(fā)癥多、死亡率高等缺點，因而不失為研究胰腺移植的較理想模型。 2、胰腺移植過程中供胰的冷缺血損傷是移植后胰腺功能不全的重要原因之。因此，若能減輕供胰的冷缺血損傷程度，對提高胰腺移植成功率可能具有至關(guān)重要的作用。 3、作為細胞死亡的另一種形式一凋亡參與了供胰低溫保存損傷過程，且隨著冷缺血時間的延長，胰腺細胞凋亡程度加重。故此，臨床上若能采取有效的抑制細胞凋亡措施，可能對減輕供胰的低溫保存損傷