宮內(nèi)亞臨床感染對(duì)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的增敏作用及其相關(guān)機(jī)制.pdf

1、背景與目的：
　　隨著醫(yī)療技術(shù)水平的不斷提高，早產(chǎn)兒的存活率明顯提高，與此同時(shí)早產(chǎn)兒腦損傷的發(fā)病率亦呈逐年增高趨勢(shì)。早產(chǎn)兒腦損傷主要包括腦室或腦室周圍出血(PIVH)及腦室周圍白質(zhì)軟化(PVL)，其中PVL是早產(chǎn)兒腦損傷中最常見的病理類型。流行病學(xué)調(diào)查資料顯示，缺氧缺血(HI)和感染是導(dǎo)致PVL或腦癱的兩個(gè)重要因素。雖然單一HI或感染不足以導(dǎo)致腦損傷，但在圍生期兩者聯(lián)合作用可能會(huì)對(duì)未成熟腦造成嚴(yán)重?fù)p傷。孕母絨毛膜炎、胎膜早破及早產(chǎn)

2、兒窒息缺氧等情況在臨床工作中均較常見，且常常同時(shí)存在。生后感染對(duì)HI的協(xié)同作用國(guó)外已有較多研究，而關(guān)于宮內(nèi)亞臨床感染對(duì)新生鼠HI是否具有增敏作用，目前國(guó)內(nèi)外尚無明確報(bào)道，且其相關(guān)的動(dòng)物模型也不完全成熟。因此，本實(shí)驗(yàn)首先建立宮內(nèi)亞臨床感染聯(lián)合新生鼠HI動(dòng)物模型，從MBP、MAP-2及TNF-a等方面證明腦損傷的存在，并在此基礎(chǔ)上，驗(yàn)證EPO對(duì)腦白質(zhì)損傷的保護(hù)作用，通過檢測(cè)未成熟腦損傷后組蛋白去乙?；?HDACs)及組蛋白去乙?；?mR

3、NA(HDAC1 mRNA)表達(dá)水平變化，從表觀遺傳學(xué)方面探討未成熟腦損傷可能的相關(guān)機(jī)制。
　　材料與方法：
　　孕鼠分為L(zhǎng)PS組和生理鹽水(N.S)組，于孕15天分別腹腔注射LPS0.3mg/kg或等劑量N.S，繼續(xù)飼養(yǎng)至分娩，稱取新生鼠出生體重。5日齡新生大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、LPS組、HI組、LPS+HI組。根據(jù)是否采用EPO干預(yù)，將LPS+HI組分為L(zhǎng)PS+HI+N.S組、LPS+HI+EPO組。
　　缺氧缺血性

4、腦損傷模型參照Rice等的方法并略加改進(jìn)。采用乙醚吸入麻醉，分離并雙結(jié)扎左頸總動(dòng)脈，中間剪斷左頸總動(dòng)脈，縫合皮膚傷口后放回鼠籠恢復(fù)1h，而后將其放入濕化、含氧氣濃度為8％的36℃恒溫箱內(nèi)40min即制成腦缺氧缺血模型，即HI組、LPS+HI組。對(duì)照組及LPS組動(dòng)物只分離左頸總動(dòng)脈，不進(jìn)行動(dòng)脈結(jié)扎和缺氧處理。干預(yù)組在HI前4h和HI后立即腹腔內(nèi)注射EPO(5000U/kg)或等劑量N.S，每天用藥1次，持續(xù)應(yīng)用至HI后第4天（共5次）。<

5、br>　　HI后6h、24h、7d處死新生鼠，留取腦組織。ELISA方法檢測(cè)腦組織中TNF-a及HDACs含量，免疫組化法檢測(cè)MAP-2的表達(dá)及HI后7d（即12日齡）腦組織MBP蛋白含量，MAP-2mRNA及HDAC1 mRNA含量采用Real Time PCR方法檢測(cè)。
　　結(jié)果：
　　1.不同處理組孕鼠及新生大鼠一般情況比較
　　N.S組與LPS組孕鼠活動(dòng)量、飲食、仔鼠死產(chǎn)率等無差異，兩組均未出現(xiàn)早產(chǎn)、死胎等。N

6、.S組孕鼠分娩的新生大鼠出生體重(6.56±0.33g)與LPS組孕鼠分娩的新生大鼠出生體重(6.35±0.37g)相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.598，P=0.123)。
　　2.HI后TNF-a、MBP表達(dá)情況
　　HI后6h及24h，LPS+HI組新生大鼠腦組織TNF-a含量高于另外三組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），而其余三組之間相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HI后7d，LPS+HI組的MBP表達(dá)水平最低，與其他組

7、相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＜0.05)，另三組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.HI后MAP-2、MAP-2mRNA表達(dá)的變化
　　LPS+HI組MAP-2免疫組化染色在HI后24h出現(xiàn)散在壞死灶，其余3組均未出現(xiàn)壞死灶。LPS+HI組MAP-2mRNA在損傷后6h檢測(cè)到表達(dá)降低，后逐漸升高，與另外三組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.EPO對(duì)未成熟腦損傷后的保護(hù)作用
　　HI后7d，LPS+HI

8、+EPO組MBP的IOD值(131.59±2.24)明顯高于LPS+HI+N.S組(103.36±3.62)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　5.未成熟腦損傷后表觀遺傳學(xué)變化
　　HI后6h、24及7d，LPS+HI組HDACs及HDAC1 mRNA的表達(dá)水平均最高，與其他組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05），另三組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.宮內(nèi)亞臨床感染對(duì)新生大鼠缺氧缺血后腦損