N-乙酰半胱氨酸對(duì)內(nèi)毒素增敏的新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：圍生期腦損傷是導(dǎo)致新生兒死亡和兒童傷殘的重要原因。圍生期腦損傷的發(fā)病原因包括多個(gè)方面，其中窒息導(dǎo)致的腦缺氧缺血以及感染被認(rèn)為是最重要的原因，并且感染對(duì)缺氧缺血導(dǎo)致的腦損傷有增敏作用。N-乙酰半胱氨酸(NAC，N-acetylcysteine)具有抗氧化和抗炎癥的作用，在成年腦缺氧缺血?jiǎng)游锬Ｐ蜕嫌猩窠?jīng)保護(hù)作用，對(duì)未成熟腦損傷的保護(hù)作用尚未見(jiàn)詳細(xì)報(bào)道。本研究將NAC應(yīng)用于已經(jīng)建立的內(nèi)毒素(LPS，lipopolysaccharide)

2、增敏新生大鼠缺氧缺血性(HI)腦損傷模型，探討NAC對(duì)未成熟腦腦損傷的影響和作用機(jī)制。 對(duì)象：8日齡Wistar大鼠98只，性別不拘，其中86只隨機(jī)分為3組：對(duì)照組(n=29)、小劑量(25mg/kg)(n=31)和大劑量(200mg/kg)(n=26)NAC治療組，HI后7天進(jìn)行腦組織病理學(xué)檢查，評(píng)價(jià)NAC對(duì)腦損傷程度的影響；另外12只隨機(jī)分為2組：對(duì)照組(n=6)和大劑量NAC治療組(n=6)，HI后24h進(jìn)行腦組織勻漿，進(jìn)

3、行酶活性和蛋白印跡的檢測(cè)。 方法：1、LPS增敏的新生大鼠HI腦損傷動(dòng)物模型制備：新生大鼠腹腔注射LPS(0.1mg/kg)，3天后結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈并吸入濃度7.7％的氧氣40min。 2、給藥方法和藥物劑量：用于評(píng)價(jià)腦損傷程度的大鼠分別在應(yīng)用LPS后1h、HI前2h、HI后0h和24h腹腔注射生理鹽水或NAC(25mg/kg或200mg/kg)，共4次。用于測(cè)定腦組織半胱天冬酶-3和胞襯蛋白者分別在應(yīng)用LPS后1h、H

4、I前2h、HI后0h腹腔注射生理鹽水或NAC(200mg/kg)，共3次。 3、腦組織病理學(xué)檢查：HI后7天灌注后取出腦組織，固定后常規(guī)脫水、包埋，連續(xù)切片，進(jìn)行微管相關(guān)蛋白2(microtubule-associatedprotein2，MAP2)、髓鞘堿性蛋白(myelinbasicprotein，MBP)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)和植物血凝素(1ectin)染色

5、。 4、半胱天冬酶-3和胞襯蛋白測(cè)定：HI24h后斷頭處死大鼠，大腦分左右半球進(jìn)行超聲勻漿，組織萃取液用于測(cè)定半胱天冬酶-3的活性、半胱天冬酶-3和胞襯蛋白蛋白印跡。 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)值采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-x)±s)表示，采用非配對(duì)t檢驗(yàn)、Mann-WhitneyU檢驗(yàn)或ANOVEPostHoc檢驗(yàn)，用StatView軟件處理。 結(jié)果：1、LPS增敏的新生大鼠HI腦損傷包括皮層、海馬、丘腦和紋狀體等部位，大劑

6、量NAC治療組各部位的損傷均較對(duì)照組明顯減輕。 2、對(duì)照組腦梗塞體積和組織缺失體積分別為24.22±4.05mm3和88.26±10.16mm3，大劑量NAC治療組為5.26±1.60mm3和29.42±6.08mm3，大劑量NAC治療組較對(duì)照組損傷明顯減輕，小劑量NAC治療組與對(duì)照組相比無(wú)明顯差別。 3、對(duì)皮層下白質(zhì)進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)對(duì)照組新生大鼠腦組織中出現(xiàn)髓鞘形成受阻，大劑量NAC治療組改變則較輕。 4、對(duì)照組新

7、生大鼠腦組織中星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目增多，大劑量NAC治療組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目較對(duì)照組明顯減少。 5、HI24h后半胱天冬酶-3的活性顯著升高，大劑量NAC治療后其活性較對(duì)照組顯著降低，蛋白印跡結(jié)果也提示17kDa的半胱天冬酶-3活性片斷在大劑量NAC治療組較對(duì)照組明顯減少。 6、胞襯蛋白蛋白印跡結(jié)果顯示HI24h后胞襯蛋白被鈣依賴蛋白酶(calpain和)半胱天冬酶-3降解，其150kDa和120kDa的兩個(gè)活性片斷在