小型豬特異性麻醉頡頏劑的研制及其催醒機(jī)理的研究.pdf

1、小型豬復(fù)合麻醉劑——XFM,是依據(jù)平衡麻醉理論和小型豬的生理特點(diǎn),通過系列科學(xué)組方試驗(yàn)研制成功的一種小型豬專用的麻醉劑。XFM麻醉誘導(dǎo)迅速,麻醉維持時(shí)間適宜,蘇醒平穩(wěn);該麻醉劑對小型豬的麻醉效果確實(shí),鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、肌松效果理想且均衡:對呼吸、循環(huán)系統(tǒng)影響輕微:無明顯的副作用:可提供60～75min麻醉深度適宜的外科手術(shù)時(shí)間:對心、腦功能無明顯的損害,該麻醉劑可以滿足相關(guān)領(lǐng)域科研工作及臨床診療的麻醉需要。為了更好的將XFM在臨床上推廣應(yīng)用,

2、保障科研試驗(yàn)后小型豬生理機(jī)能快速恢復(fù)及實(shí)現(xiàn)對XFM麻醉時(shí)間的可控性,擬研制山高效、安全,無明顯毒、副作用的特異性的頡頏劑,并對其進(jìn)行較為全面、客觀的評價(jià),同時(shí)對小型豬特異性麻醉頡頏劑的催醒機(jī)理進(jìn)行系統(tǒng)、深入地研究。
　　 通過正交試驗(yàn)和最佳組方篩選試驗(yàn),成功研制出小型豬特異性麻醉頡頏劑;同時(shí)對小型豬特異性麻醉頡頏劑的急性毒性、蓄積毒性、耐受性、亞慢性毒性、局部刺激性和藥物穩(wěn)定性進(jìn)行了研究;并建立了大鼠XFM麻醉模型,分別在注射X

3、FM后10、30和60min后再注射小型豬特異性麻醉頡頏劑。于不同的蘇醒階段剖殺,取不同腦區(qū)組織樣品,采用差速離心法分離了大腦皮層、海馬、小腦、丘腦及腦干等腦區(qū)突觸體,采用比色法測定了小型豬特異性麻醉頡頏劑對不同腦區(qū)突觸體ATP酶活性的影響,系統(tǒng)地研究了其催醒作用產(chǎn)生的CNS細(xì)胞信號(hào)跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子學(xué)機(jī)制;采用ELISA和比色法動(dòng)態(tài)監(jiān)測了小型豬特異性麻醉頡頏劑對不同腦區(qū)NO/cGMP和cAMP兩大信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的影響,系統(tǒng)地研究了其催醒作用

4、產(chǎn)生的CNS細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子學(xué)機(jī)制。試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.小型豬特異性麻醉頡頏劑的研制
　　 (1)通過預(yù)試驗(yàn)、科學(xué)組方試驗(yàn)、正交驗(yàn)證性試驗(yàn)以及最佳組方篩選試驗(yàn),確定頡頏劑成份為阿替美唑、氟馬西尼和納洛酮,最佳比例為0.90:0.79:0.26(按合劑中單一注射體積計(jì)算),并命名為小型豬特異性麻醉頡頏劑。
　　 (2)中國實(shí)驗(yàn)用小型豬在注射XFM后30min再注射0.08mL·kg-1小型豬特異性麻醉頡頏

5、劑,然后進(jìn)行全面的催醒監(jiān)測。結(jié)果表明:蘇醒時(shí)間短,蘇醒期平穩(wěn);該頡頏荊對小型豬的催醒效果確實(shí),姿態(tài)、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、肌松和聽覺反應(yīng)恢復(fù)效果理想且均衡;對呼吸、循環(huán)系統(tǒng)影響輕微;無明顯的副作用:對心、腦功能無明顯的損害。該頡頏劑配合XFM可滿足相關(guān)領(lǐng)域科研工作及臨床診療的需要。
　　 2.小型豬特異性麻醉頡頏劑的藥物安全性試驗(yàn)、藥物效應(yīng)評價(jià)試驗(yàn)和藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)
　　 本試驗(yàn)就小型豬特異性麻醉頡頏劑對昆明種小鼠的急性毒性、蓄積毒

6、性、耐受性和亞慢性毒性進(jìn)行了研究;使用家兔進(jìn)行皮膚刺激性試驗(yàn)、肌注刺激性試驗(yàn)和點(diǎn)眼刺激性試驗(yàn);對小型豬特異性麻醉頡頏劑中各組分聯(lián)合應(yīng)用的藥物效應(yīng)進(jìn)行了研究;對小型豬特異性麻醉頡頏劑進(jìn)行藥物穩(wěn)定性加速試驗(yàn),再將加速試驗(yàn)后的制劑與未經(jīng)加速試驗(yàn)的制劑進(jìn)行小型豬催醒效果驗(yàn)證試驗(yàn),判斷制劑的穩(wěn)定性和有效保質(zhì)期。采取序貰法進(jìn)行急性毒性試驗(yàn),測定小型豬特異性麻醉頡頏劑的ED50及LD50,計(jì)算出安全系數(shù)AI=4.04,表明小型豬特異性麻醉頡頏劑具有較

7、高的安全性;小型豬特異性麻醉頡頏劑對小白鼠有輕度蓄積作用,蓄積系數(shù)K=5.26,且小鼠對此頡頏劑均沒有產(chǎn)生耐受性;亞慢性毒性試驗(yàn)高劑量組(I/5LD50)小鼠在用藥前4d表現(xiàn)出一過性氣喘、興奮等癥狀,4d后不良反應(yīng)消失;用藥后各時(shí)間點(diǎn)稱重,各組小鼠體重差異不顯著:各組器官系數(shù)與對照組相比,著異不顯著;生化指標(biāo)在各組間差異不顯著:病理組織學(xué)檢查未見肺、肝和腎臟有明顯的病理變化;根據(jù)中位效應(yīng)法,得出聯(lián)合作用指數(shù)CI=0.463,進(jìn)一步表明小

8、型豬特異性麻醉頡頏劑組方的合理性:藥物穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明小型豬特異性麻醉頡頏劑比較穩(wěn)定,有效期為2年。
　　 3.小型豬特異性麻醉頡頏劑催醒機(jī)理的研究
　　 (1)小型豬特異性麻醉頡頏劑能明顯地激活大鼠大腦皮層和海馬的Na+,K+-ATP酶,且該酶活性在上述腦區(qū)的變化趨勢與大鼠行為學(xué)變化基本一致。表明小型豬特異性麻醉頡頏劑的催醒作用可能與激活特定腦區(qū)突觸體Na+,K+-ATP酶活性相關(guān)。大腦皮層和海馬的Na+,K+-AT

9、P酶可能是小型豬特異性麻醉頡頏劑催醒作用的靶位之一。
　　 (2)小型豬特異性麻醉頡頏劑能明顯地激活大鼠腦干和海馬的Ca2+,Mg2+-ATP酶活性,且此兩部分腦區(qū)的Ca2+,Mg2+-ATP酶活性變化趨勢與大鼠行為學(xué)變化基本一致。表明小型豬特異性麻醉頡頏劑的催醒作用可能與激活腦干和海馬的Ca2+,Mg2+-ATP酶活性相關(guān)。此酶可能是小型豬特異性麻醉頡頏劑催醒作用的靶位之一。
　　 (3)小型豬特異性麻醉頡頏劑能明顯地

10、減少海馬和丘腦cAMP含量,表明大鼠海馬和丘腦等腦區(qū)的cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)可能參與了小型豬特異性麻醉頡頏劑催醒機(jī)理的調(diào)控,小型豬特異性麻醉頡頏劑的催醒作用與抑制此兩部分腦區(qū)的cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)相關(guān)。
　　 (4)小型豬特異性麻醉頡頏劑能明顯地激活大鼠相關(guān)腦區(qū)的NOS活性和NO及cGMP產(chǎn)量。通過對大鼠行為學(xué)觀察表明:腦干NOS活性、丘腦的NO產(chǎn)量和腦干的NO產(chǎn)量、大腦皮層和腦干的cGMP含量可能在促使大鼠恢復(fù)翻正反射過程中起主