重癥肌無力特異性免疫吸附劑的制備及其性能研究.pdf

1、目的：制備一種對(duì)重癥肌無力（myasthenia gravis，MG）致病性抗乙酰膽堿受體（acetylcholine receptor，AChR）抗體具有特異性免疫吸附作用的特異性免疫吸附劑。通過對(duì) MG患者血清的體外靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)及體外動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)研究所制備的特異性免疫吸附劑對(duì)致病性抗 AChR抗體的吸附性能。通過對(duì)家兔的全血灌流體外循環(huán)實(shí)驗(yàn)研究特異性免疫吸附劑的血液相容性。
　　方法：利用懸浮再生法制備10％的球型纖維素載體，

2、并以環(huán)氧氯丙烷對(duì)載體進(jìn)行活化，環(huán)氧基含量可達(dá)92μmol/g。分別制備以球型纖維素為載體，以人工合成的人AChRα亞單位67-76位10氨基酸多肽為配基的MG特異性免疫吸附劑和以 L-色氨酸為配基的免疫吸附劑，并研究了反應(yīng)條件對(duì)多肽固定量的影響。MG患者血清體外靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)將以1份免疫吸附劑與3倍體積的抗AChR抗體陽(yáng)性的MG患者血清于37℃振蕩反應(yīng)3h，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)吸附前后血清中抗體含量計(jì)算吸附率。同時(shí)比較相同載體不同配基的

3、兩種免疫吸附劑之間的吸附率差異。MG患者血清體外動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)以1份特異性免疫吸附劑與10倍體積的抗AChR抗體陽(yáng)性的MG患者血清在37℃條件下以2ml/min的速度循環(huán)反應(yīng)4h，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)吸附前后血清中抗體含量計(jì)算吸附率。通過對(duì)家兔的全血灌流體外循環(huán)實(shí)驗(yàn)研究所制備的MG特異性免疫吸附劑的血液相容性。血液相容性實(shí)驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為球形纖維素載體對(duì)照組和以相同載體不同配基的實(shí)驗(yàn)組。對(duì)3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行全血灌流體外循環(huán)實(shí)驗(yàn)，于灌流前后

4、采血進(jìn)行血常規(guī)、血漿離子和血漿蛋白濃度測(cè)定。所得數(shù)據(jù)進(jìn)行灌流前后差數(shù) t檢驗(yàn)，比較實(shí)驗(yàn)本身及兩種免疫吸附劑對(duì)血液各項(xiàng)指標(biāo)的影響。計(jì)算各項(xiàng)指標(biāo)灌流后損失率，對(duì)兩種免疫吸附劑同一指標(biāo)損失率進(jìn)行t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果：多肽的最佳固定化條件為：最佳溫度37℃，最佳pH值9.7，最佳反應(yīng)時(shí)間20h。多肽為配基的特異性免疫吸附劑對(duì)血清中的抗 AChR抗體的吸附率最高，為40.33%±2.29%。L-色氨酸為配基的免疫吸附劑對(duì)血清中的抗 AChR抗

5、體的吸附率也較高，為22.35%±1.47%。二者比較顯示差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以球形纖維素為載體，多肽為配基所制備的特異性免疫吸附劑，在血清體外動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)中對(duì)血清中的抗 AChR抗體的吸附率隨吸附時(shí)間的延長(zhǎng)而上升，并在吸附開始后2h達(dá)到最高峰，吸附率可達(dá)26.59%。血液相容性實(shí)驗(yàn)對(duì)照組實(shí)驗(yàn)前后各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化（P>0.05）。實(shí)驗(yàn)組灌流2h后血常規(guī)及血漿離子均無明顯變化（P>0.05），血漿蛋白明顯下降。多肽為配基

6、的特異性免疫吸附劑組實(shí)驗(yàn)前后血漿總蛋白分別為57.50±2.52和46.50±3.32（g/L），血漿球蛋白分別為23.75±1.89和16.75±2.36（g/L），血漿白蛋白分別為33.75±2.63和29.50±1.91（g/L）(P<0.05)；L-色氨酸為配基的免疫吸附劑組實(shí)驗(yàn)前后血漿總蛋白分別為60.50±7.68和51.00±9.42（g/L），血漿球蛋白分別為24.25±4.57和19.50±6.40（g/L），血漿白蛋

7、白分別為36.25±3.30和31.50±3.70（g/L）（P<0.05）。對(duì)兩種免疫吸附劑同一指標(biāo)損失率進(jìn)行 t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示兩種免疫吸附劑對(duì)血漿蛋白的吸附率沒有差異（P>0.05）。
　　結(jié)論：溫度、pH值、時(shí)間對(duì)多肽的固定量有直接影響。兩種免疫吸附劑對(duì)血清中的抗 AChR抗體的靜態(tài)吸附率有顯著性差異，多肽為配基的特異性免疫吸附劑動(dòng)態(tài)吸附效果明顯，并具有良好的血液相容性。所以，以球型纖維素為載體、多肽為配基的特異性免疫吸附劑