血液HCV篩查策略的探討.pdf

1、中國丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)感染人數(shù)約達4000萬,其中約50％攜帶病毒,為全球之最,輸血傳播仍是HCV感染的重要途徑之一。HCV血液篩查檢測是防控HCV輸血傳播的最顯現(xiàn)成效的手段之一。因此,分析獻血人群流行病學特點和實施有效的HCV血液篩查策略是保障血液安全的重要任務。
　　目前基于不同檢測目的且發(fā)展較為成熟的HCV篩查技術有很多。其中抗HCVELISA檢測方法是對HCV感染應用于血液篩查中最主要、

2、最常見的實驗方法,可有效阻斷輸血傳播HCV,但因HCV感染窗口期較長可造成漏檢,而核酸檢測雖對窗口期標本有顯著的檢測優(yōu)勢,但檢測費用昂貴、實驗要求高,限制了其推廣使用?？乖贵w聯(lián)合試劑可同時檢測HCV抗體和抗原,具有較好的靈敏度和特異性[2],且具有操作簡單、檢測時間較短、實驗室環(huán)境要求不高、檢測費用相對核酸檢測低,且與現(xiàn)行的HCV-AbEIA血液篩查系統(tǒng)相兼容等特點。本文通過分析比較HCV抗體試劑,抗原抗體聯(lián)合試劑與抗體試劑在血液篩查

3、中的應用價值,意在探索一種經(jīng)濟有效的血液安全篩查策略。
　　第一部分為北京地區(qū)無償獻血人群HCV感染及流行病學調(diào)查,對獻血者進行常規(guī)抗HCVELISA檢測篩選,根據(jù)HCV5`-UTR的保守序列設計引物進行逆轉(zhuǎn)錄和巢式PCR擴增,并對RNA陽性標本進行基因分型測序分析。本次調(diào)查中北京地區(qū)無償獻血人群抗HCV血清學陽性率為0.35%,其中HCV核酸陽性率為0.10%,85%以上是第一次獻血;北京地區(qū)的無償獻血人群中HCV感染的基因型分

4、布仍以1b和2a為主,分別為63.56%、20.15%;3a基因型4.65%,3a/3b混合基因型為6.98%,3b基因型為0.78%,6a/1b混合型占3.88%。3b基因型的存在提示注射吸毒人群這一高危人群已經(jīng)成為輸血傳播風險的危險來源之一,提示需要進一步流行病學的調(diào)查明確獻血人群特點;6a基因型提示現(xiàn)在基因型分布的南北差異越來越小,這可能與近年來北京流動人口比例大幅增加有關。
　　第二部分為抗HCV-ELISA檢測方法在血液

5、篩查中的應用,采用Ortho、WT和Murex三種抗HCV-ELISA試劑對987份血液篩查中HCV抗體初篩陽性和灰區(qū)標本進行平行檢測,并進行了RIBA檢測和RNA檢測等補充實驗,分析抗體試劑檢測結(jié)果的ROC曲線,兩兩比較3種試劑的檢測結(jié)果符合性及檢出情況。Ortho、Murex在對陽性確認標本的檢出中有較好的檢出率,WT相對進口試劑的檢出率較低。除NS4片段外,進口試劑和國產(chǎn)試劑對C、NS3、NS5片段檢測結(jié)果的差異均有顯著性,尤其是

6、NS3片段,血站可根據(jù)不同抗-HCV試劑對HCV不同區(qū)段抗體的檢出特性合理選擇初復檢試劑。ROC曲線分析結(jié)果顯示:單試劑檢測確認標本約登指數(shù)(平均值:0.66)要顯著低于兩種不同試劑組合檢測(平均值:0.90),雙試劑對HCV的檢出要高于單試劑,單試劑檢測存在漏檢。漏檢標本中42例為RNA+/RIBA-或RNA+/RIBAIND,提示血清陽轉(zhuǎn)前窗口期或HCV低滴度為ELISA漏檢的重要因素之一。
　　第三部分為第四代MurexHC

7、VAg/Ab聯(lián)合檢測試劑及HCVEIA抗體試劑聯(lián)合檢測在血液篩查中的應用。采用MurexHCVAg/Ab聯(lián)合檢測試劑與MurexHCVAb檢測試劑,對987份血液篩查中HCV抗體初篩陽性和灰區(qū)標本,以及1份確認窗口期標本進行比較檢測,用RIBA、病毒核酸檢測試劑進行補充驗證實驗,用陽性檢出率、陰性檢出率和總檢出率,陽性符合率、陰性符合率和總符合率對結(jié)果進行統(tǒng)計學分析;并進一步將MurexHCVAg/Ab聯(lián)合檢測試劑分別與初篩試劑(ORT

8、HO、WT)組合,分析ROC曲線,比較抗原抗體試劑和抗體試劑聯(lián)合檢測的漏檢率和假陽性率,均有統(tǒng)計學意義,且其約登指數(shù)(0.92)略高于抗體試劑的組合(0.90);其中,MurexHCVAg/Ab和MurexHCVAb兩種試劑檢出不一致的標本共有123份,其中5例RIBA-/RNA+標本(包括確認窗口期標本),MurexHCVAg/Ab檢出4例,MurexHCVAb試劑檢出1例;15例RIBA+/RNA-標本,MurexHCVAg/Ab檢

9、出5例,MurexHCVAb試劑檢出10例。MurexHCVAg/Ab聯(lián)合檢測試劑對HCVRIBA-/RNA+標本有較好的檢出,與已在血液篩查中廣泛應用的MurexHCVAb試劑相比符合率不高;無論MurexHCVAg/Ab聯(lián)合檢測試劑還是Murex/Ortho/WTHCVAb試劑,均存在抗體檢測的漏檢可能。聯(lián)合使用不同的酶免HCV試劑進行血液HCV兩遍檢測,尤其是采用HCVAg/Ab聯(lián)合檢測試劑與抗體試劑組合應用,可以最大限度的防止經(jīng)