鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及GSTP1抑制鎘誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和PIASy調(diào)控p73α蛋白功能的研究.pdf

1、鎘是一種眾所周知的體內(nèi)和體外腎毒性重金屬。雖然已經(jīng)有許多研究涉及鎘誘導(dǎo)的腎細(xì)胞凋亡的機(jī)制,但是在分子水平上,鎘誘導(dǎo)腎細(xì)胞凋亡的機(jī)制還不是很清楚。在本文,報(bào)告了鎘誘導(dǎo)腎細(xì)胞凋亡的機(jī)制,以及谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P1(glutathione S-transferaseP1,GSTP1)對鎘誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的抑制作用。
　　 第一,研究了CdCl2誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞的凋亡及凋亡過程中caspase-3,Bc1-2,AIF蛋白表達(dá)的變化。首

2、先使用MTT法檢測發(fā)現(xiàn)CdCl2時(shí)間和濃度依賴性抑制HEK293細(xì)胞的增殖；其次通過光學(xué)倒置顯微鏡、電子顯微鏡觀察到CdCl2能夠誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞變圓脫壁,染色質(zhì)固縮、邊集,凋亡小體形成；最后通過激光共聚焦顯微鏡觀察到CdCl2誘導(dǎo)細(xì)胞線粒體膜電位的降低以及使用免疫印跡法檢測到細(xì)胞中caspase-3酶原和Bc1-2蛋白量的降低和AIF蛋白時(shí)間依賴性的從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)然后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核中發(fā)揮作用。這些數(shù)據(jù)表明CdCl2通過線粒體途

3、徑誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞的凋亡,為研究鎘誘導(dǎo)腎細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
　　 第二,谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P1(glutathione S-transferase P1,GSTP1)是哺乳動(dòng)物體內(nèi)一種重要的解毒酶,參與維持了機(jī)體內(nèi)氧化還原狀態(tài)的平衡。以往研究表明,GSTP1是一種腫瘤發(fā)生的標(biāo)志性蛋白,在腫瘤細(xì)胞對抗癌藥物耐藥性的形成過程中發(fā)揮了重要作用。在本文,研究發(fā)現(xiàn)在HEK293細(xì)胞中過表達(dá)GSTP1蛋白后,可以抑制CdC

4、l2誘導(dǎo)的線粒體膜電位(△Ψm)的降低,減少細(xì)胞色素c的釋放,抑制CdCl2激活的MAPK激酶(ERK,JNK,P38),以及阻止caspase-3激活,從而抑制CdCl2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。更重要的,又使用原代大鼠腎小管細(xì)胞作為模型,當(dāng)用腺病毒載體過表達(dá)GSTP1蛋白后,GSTP1可以抑制CdCl2誘導(dǎo)的DNA片段化(凋亡細(xì)胞的明顯特征)。這些結(jié)果表明GSTP1能夠抑制CdCl2誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　 另外,在本論文中還報(bào)告了PI

5、ASy蛋白結(jié)合并調(diào)控p73a蛋白功能的研究。P73a蛋白是p53蛋白家族成員之一,具有轉(zhuǎn)錄功能,它經(jīng)過翻譯后修飾可參與細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的過程。在本研究中,證實(shí)PIASy蛋白能夠與p73a蛋白相互結(jié)合并且利用自身的SUMO化(Sumoylation)連接酶E3活性SUMO化修飾p73a蛋白從而調(diào)控p73a蛋白的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性。過表達(dá)PIASy蛋白可以抑制p73a蛋白介導(dǎo)的p21蛋白的轉(zhuǎn)錄,因而參與調(diào)控細(xì)胞周期。這些結(jié)果表明PIASy蛋