鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡機(jī)理的研究.pdf

1、鎘可以誘導(dǎo)機(jī)體多種組織細(xì)胞發(fā)生凋亡。研究鎘誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡對(duì)于鎘的分子毒理學(xué)機(jī)制的闡明和鎘所致的損傷與致癌機(jī)理的研究具有重要意義。本文對(duì)鎘誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡發(fā)生機(jī)制做了如下研究工作： 1 鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡采用MTT。法檢測(cè)CdCl<,2>的細(xì)胞增殖抑制作用；通過倒置顯微鏡、電鏡、瓊脂糖凝膠電泳、流式細(xì)胞術(shù)等綜合鑒定CdCl<,2>誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。結(jié)果顯示：CdCl<,2>能顯著地抑制細(xì)胞的增殖，并可導(dǎo)致典型的細(xì)胞凋亡。但CdC

2、l<,2>誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有時(shí)間和濃度范圍的依賴性，超出這一范圍則主要表現(xiàn)為壞死。 2 鎘誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡的線粒體途徑通過激光共聚焦檢測(cè)線粒體膜電位，應(yīng)用Western blot法和熒光免疫法測(cè)定Caspase-3酶原、Bcl-2蛋白的變化以及檢測(cè)．AIF蛋白在細(xì)胞中的定位，應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳和Western blot法分析Bcl-2的抑制凋亡作用。結(jié)果表明：CdCl<,2>誘導(dǎo)的HEK293細(xì)胞凋亡很大程度上是通過作用

3、于線粒體來進(jìn)行的，線粒體損傷導(dǎo)致細(xì)胞色素 c 釋放與AIF轉(zhuǎn)移，從而引發(fā)的Caspases與非Caspases凋亡途徑可能在鎘引發(fā)的細(xì)胞凋亡過程中起重要作用，而Bcl-2有一定的抑制凋亡作用。 3 鎘誘導(dǎo)的HEK293細(xì)胞凋亡的鈣信號(hào)通路以激光共聚焦法檢測(cè)細(xì)胞胞內(nèi)游離ca<'2+>濃度([Ca<'2+>]<,i>)，應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳、AO/EB染色和’Western blot法等分析BAPTA-AM的抑制凋亡作用。結(jié)果表明：C

4、dCl<,2>能誘發(fā)HEK293細(xì)胞胞內(nèi)游離Ca<'2+>濃度([Ca<'2+>]<,i>)明顯上升，而鈣離子螯合劑，BAPTA-AM對(duì)CdCl<,2>誘導(dǎo)的HEK293細(xì)胞凋亡有一定的抑制作用，表明鎘引起的胞內(nèi)鈣離子的堆積可能在CdCl<,2>誘導(dǎo)的HEK293細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著重要作用。而[Ca<,2+>]<,i>的動(dòng)態(tài)觀測(cè)實(shí)驗(yàn)表明CdCl<,2>誘發(fā)的[Ca<'2+>]<,i>明顯上升與胞內(nèi)鈣庫中鈣離子的釋放和胞外鈣離子的內(nèi)流密切相