熱休克蛋白90調(diào)節(jié)HEK293細(xì)胞中c-Jun蛋白的穩(wěn)定性的相關(guān)研究.pdf

1、熱休克蛋白90(Heat Shock Protein 90，HSP90)是真核生物細(xì)胞中含量最為豐富的胞質(zhì)蛋白之一，其重要的一項(xiàng)功能是作為分子伴侶參與新生客戶蛋白的折疊、應(yīng)激后變性蛋白的再折疊及客戶蛋白的穩(wěn)定性和活性調(diào)節(jié)。迄今為止，HSP90的客戶蛋白已發(fā)現(xiàn)有100多種，主要分為轉(zhuǎn)錄因子、蛋白激酶、聚合酶等幾大類。與其它熱休克蛋白不同的是HSP90有其特異性抑制劑，常見的有格爾德霉素(Geldanamycin，GA)及其衍生物、根赤殼素

2、等，它們常常作為檢測(cè)HSP90分子伴侶活性的有力研究工具。這些化學(xué)藥物與ATP競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合HSP90分子N端的ATP/ADP結(jié)合袋狀結(jié)構(gòu)域，抑制其伴侶活性，導(dǎo)致未折疊成熟或錯(cuò)誤折疊的客戶蛋白被蛋白酶體靶向并降解，從而影響細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等多種生命活動(dòng)過程。另一方面，作為一種常見的肽醛類蛋白酶體抑制劑，MGl 32(Z-Leu-Leu-leu-CHO)能夠特異地阻斷蛋白酶體對(duì)其底物蛋白的降解。此外，c-Jun蛋白是細(xì)胞核內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因

3、子AP-1的主要組分之一，它能廣泛地參與細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄調(diào)控和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。本研究旨在證明一種HSP90作用的潛在客戶蛋白。有文獻(xiàn)報(bào)道，在Jurkat細(xì)胞中，熱休克在顯著下調(diào)integrinα-4和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β表達(dá)的同時(shí)可以明顯誘導(dǎo)hsp90、c-jun基因表達(dá)的上調(diào)。因此，c-Jun蛋白獲得了我們的關(guān)注。 我們的研究表明：HSP90的抑制劑GA能夠以劑量和時(shí)間依賴的方式降低HEK293細(xì)胞中內(nèi)源性c-Jun的蛋白水平。然而，轉(zhuǎn)染HSP

4、90質(zhì)?？梢曰厣缺籊A明顯下調(diào)的c-Jun蛋白水平；而且，過表達(dá)HSP90能夠上調(diào)HEK293細(xì)胞中內(nèi)源性c-Jun的蛋白水平，但不影響c-Jun的mRNA水平。此外，我們發(fā)現(xiàn)：HSP90通過穩(wěn)定c-Jun蛋白延長(zhǎng)c-Jun的半壽期；蛋白酶體抑制劑MGl32可以阻斷GA促進(jìn)的蛋白酶體降解c-Jun，從而回復(fù)c-Jun的蛋白水平。另一方面，轉(zhuǎn)染HSP90質(zhì)粒不影響c-Jun的磷酸化水平；但Jun-2熒光素酶報(bào)告基因分析實(shí)驗(yàn)表明，過表達(dá)