姜黃素拮抗環(huán)磷酰胺誘變作用的初步研究.pdf

1、目的:初步研究我國傳統(tǒng)中藥姜黃的主要成分姜黃素拮抗臨床常用化療藥物環(huán)磷酰胺對哺乳動物遺傳物質(zhì)誘變作用及其量效關(guān)系，探討姜黃素的抗誘變作用的細胞遺傳學機制，確認該物質(zhì)對哺乳動物染色體的保護作用，為臨床腫瘤化療過程中應用姜黃素抑制環(huán)磷酸胺的遺傳毒作用，減輕該藥的毒副反應提供實驗依據(jù)。
　　 方法:采用小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗、小鼠染色體畸變實驗和人外周血淋巴細胞微核實驗、人外周血淋巴細胞染色體畸變實驗等4個遺傳毒理學測試系統(tǒng)，以

2、小鼠的體內(nèi)實驗和人外周血淋巴細胞的體外實驗相結(jié)合，研究姜黃素對臨床常用化療藥物環(huán)磷酰胺(CPP)誘變性的抑制作用。在此實驗中，姜黃素的小鼠體內(nèi)實驗與姜黃素的人淋巴細胞體外實驗均分5組：即陰性對照組、陽性對照組、高劑量姜黃素與CPP合用組(簡稱姜黃素高劑量組)、中劑量姜黃素與CPP合用組(簡稱姜黃素中劑量組)、低劑量姜黃素與CPP合用組(簡稱姜黃素低劑量組)。小鼠微核實驗和染色體畸變實驗各組動物分別用生理鹽水或姜黃素連續(xù)灌胃7d后，腹腔注

3、射誘變劑，處死前4h各組動物均腹腔注射秋水仙素液，使細胞分裂停留在中期。微核標本用直接涂片法制片，
　　 染色體標本用滴片法制片。人外周血淋巴細胞微核實驗和染色體畸變實驗在無菌操作培養(yǎng)人外周血24h后，姜黃素各劑量組加入誘變劑以及不同劑量的姜黃素，空白組加入等量無菌生理鹽水，陽性對照組加入相應誘變劑及無菌生理鹽水，培養(yǎng)終止前4h在每個培養(yǎng)體系中加入秋水仙素液。培養(yǎng)72h后收獲細胞，采用氣干法制片。所有玻片標本經(jīng)Giemsa染色后

4、，雙盲法閱片，在光學顯微鏡的油鏡下觀察并分別計數(shù)每張玻片中的間期細胞及中期分裂相，微核細胞及染色體畸變細胞，顯微照相記錄各組標本。各劑量組間用方差分析，同組的微核率與染色體畸變率進行直線相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.小鼠骨髓細胞微核實驗：與空白組比較，陽性組的微核率明顯高于空白組(p＜0.01)，說明CPP有明顯的誘變作用。與CPP組比較，姜黃素低、中、高劑量組均有非常顯著差異(p＜0.01)；實驗中，低劑量與中

5、劑量、中劑量與高劑量有非常顯著性差異(p＜0.01)，有明顯量效關(guān)系。
　　 2.小鼠骨髓細胞染色體畸變實驗：與空白組比較，陽性組的畸變率明顯高于空白組(p＜0.01)，說明CPP有明顯的誘變作用。與CPP組比較，姜黃素高劑量組有非常顯著性差異(p＜0.01)；實驗中，低劑量與高劑量、中劑量與高劑量有非常顯著性差異(p＜0.01)，而低劑量與中劑量無顯著差異，未表現(xiàn)出明顯量效關(guān)系。經(jīng)直線相關(guān)分析，小鼠MN率與CA率存在顯著正相關(guān)

6、關(guān)系(r=0.837，p＜0.01)，說明微核的形成與染色體畸變、損傷有密切關(guān)系。
　　 3.人體外周血淋巴細胞微核實驗：與空白組比較， CPP組的畸變率明顯高于空白組(p＜0.01)，說明CPP有明顯的誘變作用。與CPP組比較，姜黃素中劑量組、高劑量組有顯著性差異(p＜0.05)，經(jīng)方差分析，在實驗中，低劑量與高劑量、低劑量與中劑量、中劑量與高劑量間均有顯著性差異(p＜0.05)，有明顯量效關(guān)系。
　　 4.人體外周血

7、淋巴細胞染色體畸變實驗：與空白組比較，陽性組的畸變率明顯高于空白組(p＜0.01)，說明CPP有明顯的誘變作用。與CPP組比較，姜黃素中、高劑量組有顯著性差異(p＜0.05)；實驗中，低劑量與中劑量、高劑量組有顯著性差異(p＜0.05)，而中劑量與高劑量無顯著性差異，未表現(xiàn)出明顯量效關(guān)系。經(jīng)直線相關(guān)分析，人外周血淋巴細胞MN率與CA率存在顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.906，p＜0.01)，說明微核的形成與染色體畸變、損傷有密切關(guān)系。