金屬硫蛋白對環(huán)磷酰胺免疫毒性保護作用的研究.pdf

1、環(huán)磷酰胺（Cyclophosphamide，CP）是臨床廣泛使用的抗腫瘤藥物，對多發(fā)性骨髓瘤、肺癌、宮頸癌、卵巢癌等惡性腫瘤均具有療效。但它對皮膚、呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)以及免疫系統(tǒng)等造成的毒副作用嚴重限制了其在臨床上的使用。免疫系統(tǒng)作為機體的防御系統(tǒng)，在抵抗外源性細菌、病毒的侵犯中起著關鍵的作用，對于腫瘤患者治療后的免疫重建也尤其重要。因此，尋找對抗CP免疫毒性的方法，擴大其使用范圍、提高腫瘤治療效果是非常必要的。金屬硫蛋白（Meta

2、llothionein，MT）是一種能被多種外源性刺激誘導的小分子量蛋白，具有解毒重金屬、調控微量元素以及防輻射等多種生理功能。MT對外源因素產生的機體損傷有一定的保護效果，這可能是通過降低機體的氧化損傷程度，促進DNA損傷修復實現(xiàn)的。鑒于CP主要是通過DNA烷基化產生細胞毒性，本研究旨在探討MT能否在一定程度上保護機體對CP產生的免疫毒性，為提高CP的臨床用藥效果提供實驗基礎和理論依據(jù)。
　　本研究用MT-/-和MT+/+小鼠進

3、行環(huán)磷酰胺染毒，通過觀察外周血、骨髓、胸腺以及脾臟等免疫器官的損傷情況，從氧化損傷和DNA損傷修復兩方面考查MT對CP所致免疫抑制毒性的保護作用及可能機制。實驗結果表明，小鼠給予CP后，外周血、骨髓、脾臟和胸腺等均發(fā)生不同程度的損傷。具體表現(xiàn)為：白細胞計數(shù)降低、微核率升高以及臟器、臟腦系數(shù)下降；且MT-/-小鼠對CP導致的以上指標的變化更加敏感。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，脾臟和胸腺中MT-/-小鼠的MDA含量高于MT+/+小鼠；脾臟和胸腺中GS

4、H-Px活力均呈降低趨勢，且MT-/-小鼠該酶活力降低更加顯著；脾臟中MT-/-小鼠SOD活力升高顯著，而 MT+/+小鼠胸腺中該酶活力在下降，在 MT-/-小鼠中該酶活力降低。以上結果表明，與MT+/+小鼠相比，MT-/-小鼠發(fā)生更加嚴重的氧化損傷。Nrf2/ARE抗氧化通路是保護機體氧化損傷的重要通路，在本研究中，我們以脾臟和胸腺為研究對象，對該通路中Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白進行了分子水平上的檢測。結果表明，染毒CP導致N

5、rf2蛋白表達量增加，MT-/-小鼠中該蛋白增加顯著，其下游蛋白HO-1和NQO-1也有類似的趨勢。這些結果提示，MT可能通過激活Nrf2信號通路改變氧化損傷相關酶的活性，從而對CP的免疫毒性產生保護作用。外周血彗星實驗表明，染毒 CP后 DNA發(fā)生嚴重的損傷。磷酸化組蛋白（γH2AX）是DNA雙鏈斷裂的標志之一，我們的結果表明，MT-/-小鼠該蛋白的表達量明顯高于MT+/+小鼠。進一步檢測了DNA損傷修復相關蛋白ATM、P53和P21

6、的表達和磷酸化活化情況。結果顯示，給予CP引起ATM和P53活化形式增加，且MT-/-小鼠中該蛋白表達量更高。P53下游分子P21雖然在染毒后表達量增加，但MT-/-小鼠組與對照組相比無顯著性差異。這些結果提示，MT能夠保護CP所致的DNA損傷，并且可能通過改變ATM、P53和P21等DNA損傷修復通路中相關蛋白的表達，從而降低CP對機體的免疫抑制毒性。本研究中，CP能夠對小鼠產生免疫抑制毒性，而MT能夠減輕CP所致的免疫抑制毒性。通過