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文檔簡介
1、目的:探討一種從新疆地產(chǎn)藥食兼用植物鷹嘴豆中提取純化金屬硫蛋白用于鉛防治的方法,并進(jìn)一步觀察不同濃度外源性植物金屬硫蛋白對鉛染毒淋巴細(xì)胞和海馬神經(jīng)元細(xì)胞作用不同時間的拮抗效應(yīng),為預(yù)防和治療鉛中毒提供理論依據(jù)。
方法:采用紫外掃描對鷹嘴豆金屬硫蛋白提取液進(jìn)行定性鑒定,使用鎘-血紅蛋白飽和法以及火焰原子吸收(AAS)法對鷹嘴豆中金屬硫蛋白的含量進(jìn)行測定,采用凝膠過濾層析技術(shù)初步純化鷹嘴豆中的金屬硫蛋白。將純化的鷹嘴豆-金屬硫蛋白配
2、制成不同濃度溶液對染毒鉛的Wistar大鼠淋巴細(xì)胞和海馬神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行體外干預(yù)實驗,觀察外源性鷹嘴豆金屬硫蛋白拮抗鉛毒性的效果。實驗中用50μmol/L的醋酸鉛對淋巴細(xì)胞和海馬神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行染毒,將金屬硫蛋白分成三個濃度組:高劑量組100μmol/L、中劑量組1μmol/L、低劑量組0.01μmol/L進(jìn)行干預(yù),同時設(shè)陰性對照與陽性對照組,陰性對照組細(xì)胞不做任何處理,陽性對照組細(xì)胞只染毒鉛。采用MTT法測定不同作用時間(24h、48h、
3、72h)各組淋巴細(xì)胞和海馬神經(jīng)元細(xì)胞存活率;通過流式細(xì)胞技術(shù)觀察細(xì)胞凋亡情況;應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測細(xì)胞外液中乳酸脫氫酶(LDH)活性、金屬硫蛋白及總蛋白含量;并用原子吸收光譜法測定細(xì)胞中鉀離子及鉛離子含量。
結(jié)果:1)鷹嘴豆中金屬硫蛋白含量為0.16mg/g;鎘-金屬硫蛋白在255nm處有一吸收峰;純化的金屬硫蛋白含量達(dá)91.30%。2)與醋酸鉛染毒組相比72h金屬硫蛋白高劑量干預(yù)組細(xì)胞存活率增高(P<0.05);金屬硫蛋白
4、24h高劑量干預(yù)組,48h中、高劑量干預(yù)組與72h各劑量干預(yù)組海馬神經(jīng)元細(xì)胞存活率較醋酸鉛染毒組增高(P<0.05),不同劑量金屬硫蛋白干預(yù)24h后,海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡率均有所下降。3)與醋酸鉛染毒組相比,高、中劑量金屬硫蛋白作用72h后,淋巴細(xì)胞上清液中LDH活性降低(P<0.05),金屬硫蛋白24h中劑量干預(yù)組、48h高劑量與中劑量干預(yù)組、72h各劑量干預(yù)組鉀離子含量降低(P<0.05);與醋酸鉛染毒組相比,海馬神經(jīng)元細(xì)胞金屬硫蛋白
5、24h各劑量干預(yù)組、48h與72h中、高干預(yù)組細(xì)胞上清液中LDH活性降低(P<0.05),金屬硫蛋白干預(yù)24h高、中劑量組,48h與72h各劑量組海馬神經(jīng)元細(xì)胞鉀離子含量降低(P<0.05)。4)與醋酸鉛染毒組相比,淋巴細(xì)胞金屬硫蛋白干預(yù)各劑量組不同時間金屬硫蛋白含量均增加(P<0.05),金屬硫蛋白24h、48h高、中劑量干預(yù)組和72h高劑量干預(yù)組淋巴細(xì)胞總蛋白含量升高(P<0.05);金屬硫蛋白干預(yù)各劑量組不同時間海馬神經(jīng)元細(xì)胞金屬
6、硫蛋白含量均增加(P<0.05),與醋酸鉛染毒組相比,金屬硫蛋白干預(yù)24h各劑量組、48h中、高劑量組與72h中、高劑量組海馬神經(jīng)元細(xì)胞總蛋白含量升高(P<0.05)。5)與醋酸鉛染毒組相比,金屬硫蛋白干預(yù)24h高、中組,48h與72h各劑量組淋巴細(xì)胞中鉛離子含量降低(P<0.05);金屬硫蛋白干預(yù)24h高劑量組、48h與72h各劑量組海馬神經(jīng)元細(xì)胞鉛離子含量降低(P<0.05)。
結(jié)論:一定劑量范圍內(nèi)金屬硫蛋白可促進(jìn)淋巴細(xì)胞
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