殺蟲劑對斜紋夜蛾UDP-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶活性的影響.pdf

1、害蟲對殺蟲劑的抗性是影響害蟲化學(xué)防治效果的重要因子，了解害蟲對殺蟲劑產(chǎn)生抗性的機(jī)理也是害蟲綜合治理的重要組成部分。昆蟲體內(nèi)解毒代謝酶活性的上升是害蟲對許多殺蟲劑產(chǎn)生抗性的重要機(jī)制，人們研究最多的是多功能氧化酶、酯酶及谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶等，這些酶對抗藥性的貢獻(xiàn)已經(jīng)有很多的研究報道，但是在實際生產(chǎn)上也有許多抗藥性的案例無法用這些代謝酶或靶標(biāo)抗性來解釋，可能還存在其他的代謝抗性機(jī)制。有研究報道昆蟲葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶參與外源化合物的代謝，因此推測認(rèn)

2、為該酶與昆蟲對殺蟲劑的解毒代謝有關(guān)。
　　本文主要建立昆蟲UDP-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶（簡稱UGT）活性測定方法，找到UGT酶活性測定的最佳條件;首次報道昆蟲UGT酶活性的分布規(guī)律，并發(fā)現(xiàn)田間殺蟲劑抗性種群UGT酶活性高于敏感種群;另外研究發(fā)現(xiàn)殺蟲劑處理后昆蟲UGT酶活性上調(diào)的現(xiàn)象。
　　1.UGT酶活性的測定方法
　　為了精確地測定UGT酶活性的大小，必須建立UGT酶活性測定的最佳條件。本文通過溫度、pH、緩沖液、底物濃度

3、、酶液濃度等條件的重復(fù)實驗，比較得出UGT酶活性測定的最適條件。結(jié)果表明，采用動力學(xué)方法，在溫度為37℃、pH=8.5、輔因子Mg2+=10mM、PBS為緩沖液的條件下，α-萘酚=100μM為底物、UDP-葡萄糖提供糖基，發(fā)生糖基轉(zhuǎn)移反應(yīng)，生成α-萘基葡萄糖苷，該糖苷在激發(fā)波長287nm和發(fā)射波長335nm、狹縫寬度為5nm的連續(xù)監(jiān)測下，來檢測熒光強(qiáng)度值的變化進(jìn)而反應(yīng)酶活性的大小。
　　2.斜紋夜蛾UGT酶活性的分布
　　由

4、于本研究以農(nóng)業(yè)重要害蟲斜紋夜蛾為供試?yán)ハx，所以必須對斜紋夜蛾UGT酶活性的分布情況做些必要的了解，為下面的實驗選材做準(zhǔn)備。本實驗通過對斜紋夜蛾兩個品系UGT酶活性的比較分析，發(fā)現(xiàn)田間抗性種群UGT酶活性高于敏感種群;通過對斜紋夜蛾不同蟲態(tài)及不同組織UGT酶活性的比較，結(jié)果顯示，斜紋夜蛾幼蟲UGT酶活性明顯高于斜紋夜蛾成蟲、卵、蛹，并且斜紋夜蛾幼蟲不同齡期之間UGT酶活性沒有顯著差異;斜紋夜蛾的中腸組織UGT酶活性最高，脂肪體次之，馬氏管

5、略低于脂肪體的，頭部UGT酶活性最低。
　　3.殺蟲劑對斜紋夜蛾UGT酶活性的影響
　　本文通過殺蟲劑誘導(dǎo)以后測定UGT酶活性的變化，來推測UGT酶對殺蟲劑的解毒代謝的貢獻(xiàn)大小，進(jìn)一步了解昆蟲抗藥性機(jī)制，可以為斜紋夜蛾以后的綜合治理方面提供指導(dǎo)性意見，對害蟲防治和抗性治理有著積極的意義。斜紋夜蛾對蟲酰肼、氯蟲苯甲酰胺、茚蟲威、氰氟蟲腙、硫丹、甲維鹽、溴氰菊酯這七種藥劑都產(chǎn)生了不同水平的抗性，在本文UGT酶活性誘導(dǎo)實驗中，殺蟲