雞免疫抑制性病毒的PCR檢測方法優(yōu)化及分子流行病學調查.pdf

1、雞群中常見免疫抑制性病毒主要有5種，分別是IBDV、MDV、ALV、REV及CIAV：除上述5種病毒外，某些毒株的呼腸孤病毒(Reovirus)、新城疫病毒、傳染性喉氣管炎病病毒等也可以造成免疫抑制(Immunosuppressive)。這些病毒除不同程度的引起機體發(fā)生原發(fā)感染甚至死亡之外，更嚴重的是以亞臨床感染的形式出現，致使感染禽的免疫系統(tǒng)受到損害，引起機體免疫功能下降，導致疫苗免疫效果降低、并發(fā)或繼發(fā)感染其它病原。根據近年的報道，

2、這幾種免疫抑制病在我國雞群中存在較為普遍，且常常出現多重感染，給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經濟損失。 針對免疫抑制性病毒在我國部分地區(qū)廣泛流行，且往往呈現混合感染的特點，傳統(tǒng)的從病料中直接分離病毒和血清學方法都很難滿足臨床診斷和做大規(guī)模流行病學調查的需要。目前單重PCR、多重PCR已經應用于這幾種病毒的診斷，并且取得了較好效果。為了更好的應用PCR方法檢測免疫抑制性病毒，本研究對目前使用的：PCR檢測方法進行了優(yōu)化，并用優(yōu)化后PCR檢測

3、方法對山東主要養(yǎng)禽地區(qū)不同雞群的雞只進行了免疫抑制性病毒的調查，進一步了解了幾種主要免疫抑制性疾病在山東的流行特點。針對山東某規(guī)?；N雞場的某些分廠出現的不同日齡種雞及所產商品肉雞NDV免疫后抗體水平明顯偏低，并且所產商品雞飼養(yǎng)到30日齡左右時生長緩慢、大腸桿菌、球蟲及新城疫病毒等感染率明顯升高，對該種雞場的不同日齡種雞及商品雞進行了免疫抑制病毒檢測和NDV抗體水平的檢測，表明免疫抑制性病毒的感染對該雞場的發(fā)病起了重要的作用。

4、本研究分2個部分： 1．雞免疫抑制病毒PCR檢測方法的優(yōu)化及應用`為進一步優(yōu)化免疫抑制性疾病PCR檢測方法，在確保與MDV、REV、ALV及CIAV的PCR檢測方法反應程序一樣的條件下，參照已發(fā)表IBDV毒株序列，在結構蛋白VP2編碼基因的高變區(qū)(VP2 variable domain,vVP2)兩端外側的保守序列內設計合成了2對寡核苷酸引物，對包括疫苗株在內的10株參考毒株進行逆轉錄酶一聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測。結果

5、10個參考毒株均能擴增出約492bp的目的片段，而對作為陰性對照的常見5種雞病病原NDV、IBV、CIAV、B．avium、E．coli均沒有擴增出任何片段；同時經臨床檢驗、序列分析表明，該檢測技術可用于臨床病料、細胞毒及雞胚毒的檢測。優(yōu)化后的PCR．檢測技術能同時一次性檢測5種病原，大大方便了臨床病例的檢測和大規(guī)模流行病學調查。運用優(yōu)化后的PCR檢測方法，對來自山東主要養(yǎng)禽地區(qū)收集、送檢的18個雞群278羽雞進行免疫抑制性病毒的檢測。

6、結果五中免疫抑制病毒的感染率分別為CIAV(46.04％)、MDV(14.03％)、IBDV(12.95％)、REV(2.51％)及ALV(2.16％)，其中被檢雞混合感染的總陽性率為21.58％。 2．山東某規(guī)?；u場免疫抑制性病毒分子流行病學調查及雞群ND疫苗免疫效果分析為了解AA肉種雞群中免疫抑制性病毒的存在狀況及其對NDV疫苗免疫效果和對商品雞生長的影響，采用多重PCR、RT-PCR和血清學方法對山東某規(guī)模化大型AA父母

7、代肉種雞場的28日齡、180日齡左右種雞及其所生產的1日齡、30日齡左右商品雞進行IBDV、MDV、ALV、REV、CIAV及REOV感染狀況調查，并同時對雞群NDV免疫后抗體水平進行跟蹤監(jiān)測，結果表明種雞和商品雞均存在CIAV的感染，并不同程度的存在CIAV與MDV、IBDV等共感染；發(fā)病雞群NDV抗體水平明顯偏低的原因是由于雞群感染免疫抑制性病毒所致；種雞群感染CIAV并垂直傳播給商品雞，間接引起了商品雞發(fā)生免疫抑制性病毒的共感染，