小鵝瘟病毒PCR檢測方法的建立和山東濟(jì)寧地區(qū)小鵝瘟流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、小鵝瘟是由鵝細(xì)小病毒引起的一種急性傳染病，主要侵害30日齡以內(nèi)的雛鵝和雛番鴨，以發(fā)病急，死亡率高，傳播快為特點(diǎn)。發(fā)病率和死亡率隨著日齡的增加而下降，主要侵害7日齡以內(nèi)的雛鵝和雛番鴨，根據(jù)發(fā)病情況分為3種類型，最急性型，急性型和亞急性型（殷震and劉景華，1997）。發(fā)病鵝主要以腸粘膜脫落，壞死，腸栓，脫水等為癥狀。1966年，匈牙利學(xué)者 Derszy用鵝胚也分離到病毒，他是國外第一個(gè)用鵝胚分離到病毒的人，并于1967年對本病進(jìn)行了詳盡的

2、描述，但當(dāng)時(shí)他卻把該病誤認(rèn)為流感，直到1971年 Schettler確定這種病是由細(xì)小病毒引起。1978年建議把這種病稱為鵝細(xì)小病毒感染，1974年世界禽類學(xué)會(huì)為紀(jì)念 Derzsy的先期工作而將此病命名為 Derzsy氏病（Derzsy D，1975）。1995年 Zadori等首次報(bào)道了 GPV全基因序列,并將其與番鴨細(xì)小病毒基因序列進(jìn)行了同源性比較（Zadori Z，1995）。
　　本病大流行具有一定周期性。在大流行以后當(dāng)年

3、余下的鵝群都獲得了主動(dòng)免疫，使次年的雛鵝具有天然被動(dòng)免疫力，故本病不會(huì)在同一地區(qū)連續(xù)兩年發(fā)生大流行。由此可見，本病的發(fā)病率和死亡率一方面和日齡有關(guān)，另一方面取決于親代母鵝的特異性抗體水平。
　　免疫預(yù)防是控制小鵝瘟的重要措施。目前已建立了PCR、ELISA、間接免疫熒光技術(shù)、微量中和試驗(yàn)等檢測小鵝瘟的方法，但是這幾種檢測方法均需特殊的儀器設(shè)備，且耗時(shí)長，不適于在基層推廣應(yīng)用。因此，建立一種更加快速、靈敏的病毒檢測方法迫在眉睫。本研

4、究建立的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，具有操作簡單，快速，適合基層推廣的特點(diǎn)。
　　近年來小鵝瘟在我國的一些省、市、自治區(qū)均有流行,給養(yǎng)鵝業(yè)造成嚴(yán)重的危害,同時(shí)也給飼主帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失,因此受到國內(nèi)外學(xué)者和工作者的廣泛關(guān)注。
　　本研究通過工作之便，對所在地區(qū)鵝養(yǎng)殖現(xiàn)狀和小鵝瘟發(fā)病情況做了相應(yīng)的調(diào)查，并對其流行情況做了匯總，以期對養(yǎng)鵝業(yè)小鵝瘟疾病的發(fā)生做出相關(guān)的預(yù)防措施。
　　本研究根據(jù)GENBANK上發(fā)表的小鵝瘟的vp3的序列信

5、息，設(shè)計(jì)了一對特異性引物，通過優(yōu)化各種條件，最終擴(kuò)增出與預(yù)期片段大小一致的314bp的核酸片段，在通過相應(yīng)的特異性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)此引物僅能擴(kuò)增出小鵝瘟的特異片段，能夠用來檢測小鵝瘟的發(fā)生。
　　本研究中對于分離到的10株病毒進(jìn)行測序分析，結(jié)果顯示分離株之間，同源性最高達(dá)100％，最低也在95.2%以上，說明小鵝瘟病毒的擴(kuò)增片段核苷酸變異很小，VP3是小鵝瘟的主要抗原，所以本研究對于免疫預(yù)防具有指導(dǎo)性的意義。
　　依據(jù)本研究中調(diào)查的