我國(guó)部分地區(qū)規(guī)?；Z場(chǎng)五種重要病毒病的流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、我國(guó)是世界養(yǎng)鵝大國(guó)，鵝的存欄量和出欄量一直穩(wěn)居世界第一位。但是隨著我國(guó)養(yǎng)鵝業(yè)的不斷發(fā)展，鵝的飼養(yǎng)密度不斷增大，發(fā)病率逐年增多，特別是小鵝瘟、禽流感、新城疫、坦布蘇病毒感染和鵝圓環(huán)病毒感染等，它們單一感染或共感染，造成鵝的發(fā)病、死亡或生產(chǎn)性能降低，給養(yǎng)鵝業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　1、建立針對(duì)鵝病毒病的快速檢測(cè)方法是進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查的重要前提。本研究根據(jù)H9亞型禽流感病毒(H9-AIV)的HA基因、新城疫病毒的HN基因和坦布蘇病毒

2、的NS3基因的保守序列，設(shè)計(jì)合成3對(duì)特異性引物；采用Tizol法提取H9-AIV、NDV和TMUV的RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA，混合后作為PCR體系模板。在普通PCR方法的基礎(chǔ)上，通過對(duì)退火溫度、ExTaq DNA聚合酶、Buffer濃度、2.5mmol/L dNTP濃度、引物濃度比等反應(yīng)體系及條件進(jìn)行優(yōu)化，建立同時(shí)擴(kuò)增H9-AIV(560bp)、NDV(427bp)和TMUV(277bp)的多重RT-PCR方法。經(jīng)特異性、敏感性及臨床驗(yàn)

3、證性試驗(yàn)，結(jié)果表明：在同一 RT-PCR反應(yīng)體系中可以同時(shí)檢測(cè)到這3種病毒，而對(duì)鶴呼腸孤病毒、鵝細(xì)小病毒、鴨呼腸孤病毒的檢測(cè)均為陰性；H9-AIV、NDV和TMUV的最低檢出限分別為5如105個(gè)拷貝、7.2X105個(gè)拷貝和4加105個(gè)拷貝。利用該方法對(duì)臨床陽(yáng)性樣品進(jìn)行檢測(cè)驗(yàn)證，結(jié)果均一致。證明建立的多重RT-PCR方法可對(duì)H9—AIV、NDV和TMUV同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，具有簡(jiǎn)便快速、特異性好、靈敏度高、實(shí)用性強(qiáng)的特點(diǎn)，可為鵝群這三種疾病的檢

4、測(cè)和診斷提供快速準(zhǔn)確的方法，便于及時(shí)有效的采取防控措施，減少養(yǎng)鵝業(yè)的損失。
　　2、為了解小鵝瘟、H9亞型禽流感、新城疫、坦布蘇病毒感染和鵝圓環(huán)病毒感染等重要鵝病毒病在我國(guó)的流行情況，本研究于2014-2015年間在我國(guó)11個(gè)主要養(yǎng)鵝省份的規(guī)?；Z場(chǎng)，采集臨床上發(fā)病鵝的病料478羽份，應(yīng)用建立的針對(duì)H9-AIV、NDV和TMUV多重RT-PCR檢測(cè)方法進(jìn)行H9-AIV、NDV和TMUV的檢測(cè)；應(yīng)用建立的針對(duì) GPV和GoCV的普通

5、PCR檢測(cè)方法進(jìn)行鵝細(xì)小病毒和鵝圓環(huán)病毒的檢測(cè)；并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明478份樣品中，單一感染190份，雙重感染82份，三重感染30份，四重感染3份，陽(yáng)性率分別為40％、17%,6%、1%，陰性感染173份，比例為36%; GPV、H9-AIV、NDV、TMUV和GoCV感染的陽(yáng)性檢出率分別為17.1%、21.7%、18.4%、17.4%和21.7%。GPV、H9—AIV、TMUV和GoCV等病毒的感染中混合感染比例較高，分

6、別為55%、62%、74%和54%，NDV感染中混合感染的比例相對(duì)較低，為44%。不同季節(jié)發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)分析表明，H9和ND在春、冬季節(jié)的檢出率最高，在夏、秋季節(jié)相對(duì)較低；TMUV和GoCV在夏季檢出率較高，冬季檢出率較低，GPV在春季檢出率較高。不同日齡發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)分析表明，H9和GoCV在不同日齡段檢測(cè)的陽(yáng)性率均很高，成年鵝中檢測(cè)的陽(yáng)性率最高；NDV、TMUV在不同日齡段檢測(cè)的陽(yáng)性率差異不顯著，但雛鵝和成年鵝感染率偏高；GPV在雛鵝時(shí)