海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)疫苗對淡、海水養(yǎng)殖魚類的保護性試驗.pdf

1、近年來我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅猛,隨著高密度、集約化、大規(guī)模水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的出現(xiàn),魚類疾病頻繁爆發(fā)。特別是細菌性疾病種類多、發(fā)病率和死亡率高,給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。由于藥物的頻繁使用,導(dǎo)致了大量耐藥性病原菌的出現(xiàn),同時也造成大量的藥物殘留,對人類食品安全及人類健康提出巨大挑戰(zhàn)?，F(xiàn)代水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè),接種疫苗已被作為評價標準漁業(yè)養(yǎng)殖計劃的一個重要組成部分,開發(fā)環(huán)保高效的魚病疫苗成為當今水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的當務(wù)之急。本研究主要針對給淡、海水魚類養(yǎng)殖

2、業(yè)帶來巨大危害的海豚鏈球菌(Streptococcus iniae S.iniae)病,以制備的海豚鏈球菌滅活疫苗為研究對象,主要進行了海豚鏈球菌滅活疫苗對淡水羅非魚和海水花鱸魚的保護性試驗。通過本試驗篩選了最佳疫苗免疫原用量和最佳免疫佐劑,同時也對藥物免疫調(diào)節(jié)劑在魚類中應(yīng)用進行了初步探討。為海豚鏈球菌滅活疫苗的推廣應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。
　　 將S.iniae海水株HD-1、HD-4,S.iniae淡水株TBY-1,TBY-5的培養(yǎng)

3、液滅活后,制備弗氏佐劑滅活疫苗,腹腔注射接種羅非魚(1×1010CFUxmL-10.1mL×尾-1),經(jīng)過兩次免疫,初次免疫后35天,分別用對應(yīng)的菌株攻毒,統(tǒng)計14天內(nèi)各組魚的死亡情況,計算各免疫組的相對保護率(RPS),并測定各組魚血清抗體效價的變化。結(jié)果表明:HD-1株弗氏佐劑滅活疫苗保護率達到93.6％,最高血清抗體凝集效價達到1:64；TBY-1株弗氏佐劑滅活疫苗保護率達到100％,最高血清抗體凝集效價達到1:64。海水株HD-

4、1和淡水株TBY-1免疫效果均較好,可作為海水魚和淡水魚制苗菌株的候選。
　　 利用S.iniae海水株HD-1對大亞灣地區(qū)主要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟魚類石斑魚、紅鰭笛鯛、卵圓鯧鲹、花鱸及美國紅魚進行攻毒試驗。結(jié)果顯示花鱸魚對S.iniae海水株HD-1最為敏感,可以作為S.iniae海水株HD-1滅活疫苗試驗用魚進行進一步的相關(guān)試驗。
　　 將S.iniae海水株HD-1制備成1010CFUxmL-1、109CFUxmL-1及

5、108CFUxmL-1三種菌體抗原濃度的白油佐劑滅活疫苗對花鱸魚進行了免疫保護性試驗,攻毒結(jié)果顯示:1010CFUxmL-1組相對保護率為100％、109CFUxmL-1組相對保護率為92.5％、108CFUxmL-1組相對保護率為85％、對照組的死亡率是100％；最高抗體滴度分別為1:16、1:64、1:32。1010CFUxmL-1組相對保護率與109CFUxmL-1組相對保護率比較,無顯著性差異(p>0.05)；與108CFUxm

6、L-1組相對保護率為85％比較,1010CFUxmL-1組保護率較高,具有顯著性差異(p<0.05)。綜合考慮生產(chǎn)實際等各項指標,本試驗采用109CFUxmL-1菌體抗原濃度為制苗用菌體抗原量的濃度。
　　 將含109CFUxmL-1菌體抗原濃度的S.iniae海水株HD-1滅活并制備成白油佐劑疫苗和鋁膠佐劑疫苗,對花鱸魚進行免疫保護性試驗,攻毒結(jié)果顯示:白油佐劑疫苗獲得92.5％的相對保護率,鋁膠佐劑疫苗組獲得82.5％的相對

7、保護率；兩種疫苗的最高抗體滴度分別為1:64、1:32。兩者比較具顯著性差異(p<0.05)。白油佐劑疫苗獲得較好的保護效果,可以有效防制花鱸魚海豚鏈球菌病。
　　 將左旋咪唑和中藥蘆薈多糖分別以一定的量加入到109CFUxmL-1菌體抗原濃度的S.iniae海水株HD-1白油佐劑滅活疫苗中制備成復(fù)合佐劑疫苗(compound adjuvant vaccine),同時設(shè)白油佐劑疫苗基礎(chǔ)上單獨注射蘆薈多糖組、白油佐劑組及PBS組,

8、對花鱸魚進行免疫保護性試驗,攻毒結(jié)果顯示:各試驗組相對保護率差異性不顯著(p>0.05)；但白油佐劑滅活疫苗加單獨注射蘆薈多糖組魚血清抗體滴度比其他各組要高(p<0.05),而左旋咪唑復(fù)合佐劑疫苗組魚血清抗體效價顯著低于白油佐劑滅活疫苗組(p<0.05),另外各組血清抗體滴度之間比較沒有顯著性差異。測定各組血清中溶菌酶變化顯示,單獨注射免疫增強劑蘆薈多糖組血清溶菌酶含量明顯比其他各組都要高(p<0.05),試驗結(jié)果表明:中藥免疫增強劑蘆