血藍(lán)蛋白在雜色鮑各組織中的表達(dá)與分布規(guī)律研究.pdf

1、 學(xué) 校 代 碼 學(xué) 校 代 碼 ： 1 0 2 6 4 1 0 2 6 4 研究生學(xué)號(hào)： M1110104176上 海 海 洋 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文 碩 士 學(xué) 位 論 文 題 目： 目： 血藍(lán)蛋白在雜色鮑各組織中的表達(dá)與分布規(guī) 血藍(lán)蛋白在雜色鮑各組織中的表達(dá)與分布規(guī)律研究 律研究 英文題目： 英文題目： Studies on the expressing and distributing charact

2、eristic of Hemocyanin in different tissues of Haliotis diversicolor 專 業(yè)： 業(yè)： 臨床獸醫(yī)學(xué) 研究方向： 研究方向： 漁業(yè)生物病害 姓 名： 名： 張晗 指導(dǎo)教師： 指導(dǎo)教師： 王江勇 研究員 上海海洋大學(xué)，上海，200090 中國水產(chǎn)科學(xué)院南海水產(chǎn)研究所，廣州 ，510300 上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文 I 血藍(lán)蛋白在雜色鮑各組織中的表達(dá)與分布規(guī)律

3、研究 摘 要 血藍(lán)蛋白（hemocyanin）是節(jié)肢、軟體動(dòng)物中的一種多功能蛋白，具有氧氣運(yùn)輸、免疫防御、蛋白質(zhì)儲(chǔ)存、金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)、蛻皮激素載體、滲透壓調(diào)節(jié)和表皮固化等多種功能。 血藍(lán)蛋白在血淋巴中的含量非常豐富， 然而作為一種重要的多功能蛋白， 對(duì)其成熟的蛋白分子在動(dòng)物各組織中的分布情況了解較少， 其組織表達(dá)的具體部位尚不明確。 本研究通過免疫組化技術(shù)、 熒光定量 PCR 技術(shù) （qPCR）和熒光原位雜交技術(shù)（FISH）對(duì)血藍(lán)蛋白在

4、雜色鮑（Haliotis diversicolor）各組織中的表達(dá)與分布規(guī)律進(jìn)行了研究， 對(duì)深入理解血藍(lán)蛋白分子功能的多樣性及軟體動(dòng)物血藍(lán)蛋白組織表達(dá)規(guī)律的生理適應(yīng)性具有重要意義。 首先通過 Western Blotting 方法對(duì)雜色鮑血藍(lán)蛋白多克隆抗體的濃度進(jìn)行了優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)上樣量 10 μg 時(shí)，一抗 1:12000 的稀釋度所見清晰條帶最多；在一抗1:12000 的稀釋度時(shí)，不同上樣量（1 μg、2 μg、4 μg 和 8 μg）

5、Western 結(jié)果的雜交條帶都比較清晰，故 1:12000 的抗體稀釋度最適合本研究。進(jìn)一步的免疫組化研究發(fā)現(xiàn)， 在成鮑和幼鮑各組織中均發(fā)現(xiàn)了血藍(lán)蛋白陽性信號(hào)， 但不同組織中信號(hào)強(qiáng)弱不同，在成鮑與幼鮑中血藍(lán)蛋白的組織分布一致，均為肝胰臟、外套膜和鰓中大量分布，而消化道和腹足中的分布相對(duì)較少。 其次，采用 qPCR 技術(shù)對(duì)編碼血藍(lán)蛋白的兩個(gè)亞型基因（Hc1、Hc2）在各組織中的表達(dá)水平進(jìn)行了研究。 首先， 根據(jù)課題組克隆得到的雜色鮑血藍(lán)

6、蛋白全基因序列對(duì)兩個(gè)基因分別設(shè)計(jì)了兩對(duì)特異引物，利用腹足、鰓和鰓下腺組織的cDNA 作為模板，對(duì)引物的特異性進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)引物 Hc1F2/Hc1R2 和Hc2F1/Hc2R1 的特異性良好。qPCR 檢測結(jié)果表明，Hc1 與 Hc2 在成鮑腹足、外套膜、上足、鰓下腺、鰓、肝胰臟和血細(xì)胞中均有表達(dá)，并且兩基因的組織表達(dá)豐度一致，均在肝胰臟、外套膜、鰓下腺和鰓中較高，而血細(xì)胞、腹足和上足中較低。兩個(gè)基因相比較發(fā)現(xiàn)，各組織中 Hc1 表達(dá)量