過(guò)氧化酶體增殖體受體激動(dòng)劑延緩大鼠腎臟衰老的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、腎臟衰老一直是臨床與基礎(chǔ)研究都非常感興趣的問(wèn)題,隨著衰老,腎臟的形態(tài)以及功能都發(fā)生顯著的改變,腎小球?yàn)V過(guò)率不依賴于明顯的病理改變而逐漸下降,衰老導(dǎo)致了腎小球、血管、腎臟實(shí)質(zhì)等一系列改變。諸如高血壓、糖尿病都可以對(duì)老齡腎臟造成一定的損傷。我們的研究以腎臟衰老為突破口,以此發(fā)現(xiàn)器官衰老的主要環(huán)節(jié),揭示器官衰老的一些共同機(jī)制,提出延緩衰老的有效措施。本課題擬在原有的研究基礎(chǔ)上,從腎臟衰老入手,觀察PPARγ在腎臟表達(dá)的隨齡變化情況,證實(shí)PPA

2、Rγ在腎臟衰老中的作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮治療腎臟衰老的安全性和有效性,從氧化應(yīng)激狀態(tài)、信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期影響細(xì)胞分化等角度對(duì)其抗衰老的分子機(jī)制進(jìn)行初步探討,并運(yùn)用代謝組學(xué)的技術(shù)開展延緩大鼠腎臟衰老的分析和生物標(biāo)記物發(fā)現(xiàn),將分子牛物學(xué)與代謝組學(xué)技術(shù)結(jié)合起來(lái),探索抗腎臟衰老的新方法、新途徑。 本文以3月、12月、24月自然衰老SD大鼠為模型,分別代表青年組、中年組、老年組。免疫組化顯示PPARγ在各年齡組大鼠腎

3、組織的腎小管、集合管上皮細(xì)胞中均有分布,主要分布于細(xì)胞核內(nèi),胞漿內(nèi)也有少量表達(dá),在老年大鼠皮質(zhì)腎小球系膜區(qū)系膜細(xì)胞、偶爾在壁層上皮細(xì)胞內(nèi)也有陽(yáng)性染色。原位雜交結(jié)果進(jìn)一步在mRNA水平上證實(shí)了這一結(jié)果。免疫印跡分析結(jié)果顯示PPARγ蛋白在大鼠腎臟衰老過(guò)程中表達(dá)下降。SOD、GSH-Px兩種衰老標(biāo)志物在大鼠腎臟衰老過(guò)程中含量也出現(xiàn)下降,并且兩組數(shù)據(jù)呈正相關(guān)。在第二部分研究里,以羅格列酮干預(yù)中年、老年大鼠12周,以能量限制為陽(yáng)性對(duì)照組。發(fā)現(xiàn)P

4、PARγ蛋白在中年、老年羅格列酮及限食組的大鼠腎臟中的表達(dá)均上調(diào)。作為衰老標(biāo)志物的P16在中年、老年羅格列酮組及限食組均出現(xiàn)不同程度的降低。P53蛋白在老年及中年各組大鼠中表達(dá)差異均不明顯。推測(cè)羅格列酮在增強(qiáng)動(dòng)物抗氧化能力的同時(shí),可能通過(guò)調(diào)節(jié)P16/Rb信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,下調(diào)P16的表達(dá)減輕對(duì)pRb的抑制,細(xì)胞周期阻滯緩解得以順利進(jìn)行,從而增強(qiáng)了中年、老年大鼠腎臟細(xì)胞的增生分化能力。另外在實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)羅格列酮能降低中年及老年大鼠的血清膽固醇

5、、甘油三酯水平,加強(qiáng)其分解對(duì)衰老腎臟起到保護(hù)作用。在第三部分實(shí)驗(yàn)中我們收集了老年對(duì)照組、羅格列酮組、能量限制組大鼠的血液樣品,運(yùn)用液質(zhì)聯(lián)用的代謝組學(xué)方法(HPLC/MS),通過(guò)比較進(jìn)入動(dòng)物血清化學(xué)成分及代謝物譜,考察了羅格列酮延緩大鼠腎臟衰老的物質(zhì)基礎(chǔ)。發(fā)現(xiàn)各組圖中主成分積分值基本集中分布于橢圓形散點(diǎn)圖的幾個(gè)區(qū)域,各組間無(wú)明顯交叉和重疊。正常組與羅格列酮組、能量限制組之間有著代謝產(chǎn)物的不同,說(shuō)明血漿代謝組學(xué)分析能夠較好地反映羅格列酮干預(yù)

6、組與正常對(duì)照組及能量限制組之間的差異。在圖譜中可以發(fā)現(xiàn)肉毒堿(Carnitine)、植物鞘氨醇(Phytosphingosine)、棕櫚酰磷脂膽堿(Palmitoyllysophosphatidylcholine)、甘油磷酰膽堿(stearoylglycerophosphocholine)等脂質(zhì)化合物改變較為明顯,這些發(fā)生改變的代謝物可以作為羅格列酮延緩老年大鼠腎臟衰老的生物標(biāo)志物做進(jìn)一步的研究。并且上述脂質(zhì)化合物與能量代謝、脂肪代謝途

7、徑密切相關(guān),這些代謝物的改變提示羅格列酮干預(yù)后動(dòng)物能量代謝及脂肪代謝功能均發(fā)生了變化,這可能是老年大鼠腎臟衰老發(fā)生、發(fā)展的潛在原因,從而揭示了羅格列酮延緩腎臟衰老的生物學(xué)本質(zhì)。 綜上所述本文認(rèn)為PPARγ參與了大鼠腎臟衰老的調(diào)控,PPARγ激動(dòng)劑羅格列酮可以增強(qiáng)老年動(dòng)物抗氧化應(yīng)激能力,通過(guò)抑制腫瘤抑制因了P16的表達(dá)而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、增強(qiáng)衰老腎臟細(xì)胞的增生分化能力,并能調(diào)節(jié)老年大鼠自身脂肪代謝紊亂,增加甘油三酯的分解,增強(qiáng)胰島素敏