過氧化物酶增殖物激活受體γ激動劑羅格列酮對MC3T3-E1細(xì)胞增殖和成骨分化的影響.pdf

1、目的:
　　1.體外觀察羅格列酮(RSG)對MC3T3-E1細(xì)胞增殖和成骨分化的影響。并初步探討其細(xì)胞通路機制。
　　2.體外觀察觀察不同濃度葡萄糖對小鼠原代成骨細(xì)胞增殖和細(xì)胞分化的影響。并初步探討其相關(guān)的機制。
　　方法:
　　1.于中科院上海細(xì)胞庫購買MC3T3-E1細(xì)胞傳代,在終濃度1、5μmol/L的RSG處理細(xì)胞,對照組用等量DMSO,培養(yǎng)7天和14天,行堿性磷酸酶(ALP)染色和ALP活性檢測,培養(yǎng)2

2、1天,行茜素紅染色,RealTimePCR檢測轉(zhuǎn)錄因子Runx2、成骨標(biāo)志物ALP、骨鈣素(OCN)基因的表達;Westernblot檢測Runx2、ALP、β-catenin、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白的表達。
　　2.取出生24小時內(nèi)小鼠顱骨原代成骨細(xì)胞。使用Ⅰ型膠原免疫熒光染色和VonKossa染色進行鑒定。在終濃度為(5.5mmol/L、15.5mmol/L、25.5mmol/L)葡萄糖處理細(xì)胞,觀察不同葡萄糖濃度

3、下成骨細(xì)胞的細(xì)胞增殖、堿性磷酸酶(ALP)活性,RealtimePCR檢測轉(zhuǎn)錄因子Runx2、成骨標(biāo)志物ALP、骨鈣素(OCN)基因的表達。
　　結(jié)果:
　　1.干預(yù)組和對照組相比,隨著RSG濃度的升高,成骨細(xì)胞的增殖能力逐漸減弱;ALP活性減低,ALP染色顏色逐漸變淺,茜素紅染色鈣結(jié)節(jié)數(shù)目逐漸減少。PCR和Westernblot檢測成骨相關(guān)指標(biāo)表達降低,ERK1/2和β-catenin的表達隨著RSG濃度的升高而降低。

4、r>　　2.15.5mmol/L組和25.5mmol/L組與對照組相比,骨細(xì)胞的增殖能力逐漸減弱,并且呈濃度依賴性。培養(yǎng)7天,正常糖組相比,實驗組ALP染色顏色逐漸變淺。PCR結(jié)果顯示Runx2mRNA、OCNmRNA、ALPmRNA表達下降,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.羅格列酮可劑量依賴性的抑制成骨細(xì)胞增殖和成骨分化,這種抑制作用可能是通過Wnt/β-catenin和ERK1/2通路實現(xiàn)的。