股骨頭缺血壞死的發(fā)病機(jī)制及與血栓前狀態(tài)關(guān)系的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的：大量應(yīng)用激素及酒精中毒與股骨頭缺血壞死(ANFH)的密切關(guān)系已得到了廣大學(xué)者的認(rèn)同，二者共占全部ANFH病例的2/3。但關(guān)于激素和酒精引起股骨頭缺血壞死的具體機(jī)制還不清楚，近幾年來，微血管損傷學(xué)說和血管內(nèi)凝血學(xué)說越來越被引起重視。為此，采用灌注酒精、單純激素和馬血清加激素的不同方法，制造兔股骨頭缺血壞死模型；對(duì)比它們?cè)诎l(fā)病時(shí)間、病變性質(zhì)、病變部位及病變程度等的差異，對(duì)其發(fā)病機(jī)制做近一步探討，重點(diǎn)探討微血管病變?cè)贏NFH發(fā)病機(jī)制

2、中的作用。另外，通過檢測(cè)用于血栓前狀態(tài)(PTS)診斷的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)和核素標(biāo)記抗人纖維蛋白單克隆抗體(SZ-63)放免顯像，早期探測(cè)股骨頭內(nèi)微血栓，驗(yàn)證PTS與ANFH的密切關(guān)系，并為臨床早期篩選診斷和防治股骨頭缺血壞死提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法：選用健康日本大耳白兔80只，隨機(jī)分為4組，每組分為三個(gè)時(shí)間段：1個(gè)月6只；3個(gè)月8只；6個(gè)月6只。第Ⅰ組為酒精灌胃組：每日晨一次性給予含乙醇50％的烈性白酒(v/v)8mL·kg-1·d

3、-1。第Ⅱ組為激素組：連續(xù)肌注甲基強(qiáng)的松龍10mg·kg-1·d-1，共7天，之后口服強(qiáng)的松2.5mg·kg-1·d-1至實(shí)驗(yàn)完。第Ⅲ組為馬血清加激素組：先分2次間隔2周分別按10m1·kg-1量靜脈注射馬血清，第2次注射馬血清2周后，再按第Ⅱ組方法用激素。第Ⅳ組為對(duì)照組。分期分批取血觀察肝功能、血脂、血清皮質(zhì)醇的改變；肝和股骨頭組織取樣石蠟切片作HE染色、微血栓染色和彈力纖維染色；冰凍切片Sudan染色。另外，常規(guī)測(cè)定血漿凝血酶原時(shí)間

4、(APTT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(PT)、血漿纖維蛋白原(FIB)、全血粘滯度(BV)和血漿粘滯度的改變；采用放射免疫法測(cè)定內(nèi)皮素(ET-1)、免疫比濁法測(cè)定抗凝血酶-Ⅲ(AT-Ⅲ)和D-二聚體(D-dimer)的變化。并用131碘標(biāo)記的抗人纖維蛋白單克隆抗體(131I-SZ-63)行股骨放免顯像。 結(jié)果：1.血清學(xué)變化：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)明顯的肝功能損害，以酒精實(shí)驗(yàn)組改變最嚴(yán)重，GGT第3個(gè)月為(6.20±0.34u.L

5、-1)，AST和ALT第6個(gè)月時(shí)分別為(67.94±4.07u.L-1)和(79.93±7.24u.L-1)，明顯高于對(duì)照組(3.72±0.22，44.77±3.82，52.95±3.97)，差異有顯著性(P＜0.05)。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ實(shí)驗(yàn)組也均出現(xiàn)明顯的血脂升高，以馬血清加激素組最明顯，3、6個(gè)月時(shí)，TG分別為(2.63±0.33mmol.L-1，6.56±0.41mmol.L-1)，明顯高于對(duì)照組(1.03±0.27mmol.L-1，1

6、.33±0.25mmol.L-1)，差異有顯著性(P＜0.05)；6個(gè)月時(shí)，馬血清加激素組CHO為(2.83±0.36mmol.L-1)，對(duì)照組為(1.65±0.23mmol.L-1)，差異有顯著性(P＜0.05)。酒精實(shí)驗(yàn)組血清皮質(zhì)醇含量高于對(duì)照組7.48倍。 2.組織學(xué)變化：(1)肝臟變化：以酒精實(shí)驗(yàn)組肝臟損害最嚴(yán)重，3個(gè)月時(shí)，酒精實(shí)驗(yàn)組就出現(xiàn)肝細(xì)胞脂肪變和點(diǎn)狀壞死；6個(gè)月時(shí)，可見大量脂滴伴肝細(xì)胞灶性壞死和片狀壞死。單純激素

7、組和馬血清加激素組6個(gè)月時(shí)只出現(xiàn)明顯的脂肪變，偶見肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死。(2)股骨頭改變：股骨頭病理改變據(jù)Matsui分級(jí)法被分為3級(jí)進(jìn)行評(píng)價(jià)：0級(jí)無任何骨缺血壞死病理改變，骨髓和骨小梁結(jié)構(gòu)完整；1級(jí)骨壞死只見骨髓變性壞死，骨小梁無壞死，骨髓腔內(nèi)造血組織減少，脂肪組織增多，有明顯的細(xì)胞溶解，細(xì)胞核及邊界不清；2級(jí)骨壞死發(fā)生骨髓及骨小梁均壞死，除了1級(jí)的病理改變，同時(shí)有骨小梁稀疏變細(xì)或斷裂，骨陷窩空缺。酒精實(shí)驗(yàn)組第1個(gè)月時(shí)全部標(biāo)本0級(jí)無缺血壞死

8、改變；第3個(gè)月時(shí)4個(gè)股骨頭標(biāo)本0級(jí)無骨缺血壞死改變，4個(gè)股骨頭標(biāo)本1級(jí)骨缺血壞死改變(50％)，骨缺血壞死發(fā)生率為50％；第6個(gè)月時(shí)2個(gè)股骨頭標(biāo)本0級(jí)無骨缺血壞死改變，4個(gè)股骨頭標(biāo)本1級(jí)骨缺血壞死改變(50％)，2個(gè)股骨頭標(biāo)本2級(jí)骨壞死改變(25％)，骨缺血壞死發(fā)生率為75％。激素實(shí)驗(yàn)組第1個(gè)月時(shí)8個(gè)股骨頭標(biāo)本0級(jí)無骨缺血壞死改變，2個(gè)標(biāo)本1級(jí)骨缺血壞死改變(20％)，骨缺血壞死發(fā)生率為20％；第3個(gè)月時(shí)6個(gè)股骨頭標(biāo)本1級(jí)骨缺血壞死改變

9、(60％)，4個(gè)股骨頭標(biāo)本0級(jí)無骨缺血壞死改變，骨缺血壞死發(fā)生率為60％；第6個(gè)月時(shí)2個(gè)股骨頭標(biāo)本0級(jí)無骨缺血壞死改變(20％)，6個(gè)股骨頭標(biāo)本1級(jí)骨缺血壞死改變(60％)，2個(gè)股骨頭標(biāo)本2級(jí)骨缺血壞死改變(20％)，骨缺血壞死發(fā)生率為80％。馬血清加激素實(shí)驗(yàn)組第1個(gè)月時(shí)4個(gè)股骨頭標(biāo)本0級(jí)無骨缺血壞死改變，6個(gè)股骨頭標(biāo)本1級(jí)骨缺血壞死改變(60％)，骨缺血壞死發(fā)生率為60％；第3個(gè)月時(shí)2個(gè)股骨頭標(biāo)本0級(jí)無骨缺血壞死改變，4個(gè)股骨頭標(biāo)本1

10、級(jí)骨缺血壞死改變(40％)，4個(gè)股骨頭標(biāo)本2級(jí)骨壞死改變(40％)，骨缺血壞死發(fā)生率為80％；第6個(gè)月時(shí)4個(gè)股骨頭標(biāo)本1級(jí)骨缺血壞死改變(40％)，6個(gè)股骨頭標(biāo)本2級(jí)骨缺血壞死改變(60％)，骨缺血壞死發(fā)生率為100％。對(duì)照組股骨頭各時(shí)期0級(jí)無骨缺血壞死改變，骨髓和骨小梁結(jié)構(gòu)完整。馬血清加激素實(shí)驗(yàn)組小血管內(nèi)膜增生，內(nèi)彈力膜斷裂，中膜變性，重者管腔狹窄甚至閉塞，血管中有大量微血栓，主要分布在靜脈中。 3.血栓前狀態(tài)指標(biāo)觀測(cè)：1個(gè)月

11、時(shí)，馬血清加激素實(shí)驗(yàn)組即發(fā)生明顯變化，PT(8.03±0.47Sec)、APTT(30.83±3.47Sec)值較對(duì)照組PT(9.14±0.38Sec)、APTT(36.14±3.38Sec)減小(p＜0.05)；FIB(3.15±0.40g.L-1)和全血高切粘度值(4.21±0.26mpa.s)、低切粘度值(9.49±1.49mpa.s)較對(duì)照組FIB(2.32±0.23g·L-1)和高切粘度(3.83±0.26mpa.s)、低切粘

12、度(8.14±0.63mpa.s)增高(p＜0.05)；AT-Ⅲ(61.44±5.05mg.L-1)較對(duì)照組(112.92±9.04mg.L-1)降低(p＜0.05)；D-dimer(0.53±0.19ug.ml-1)和ET-1(47.84±12.09pg·L-1)較對(duì)照組(0.43±0.11ug.m1-1)和(37.32±4.12pg·L-1)升高(p＜0.05)。3個(gè)月時(shí)，其它實(shí)驗(yàn)組才發(fā)生變化。將實(shí)驗(yàn)1中發(fā)生股骨頭壞死的動(dòng)物與正常對(duì)

13、照組的PTS特異性血液學(xué)指標(biāo)聯(lián)合進(jìn)行比較后顯示，發(fā)生1、2期骨壞死的動(dòng)物D-二聚體和ET-1均較對(duì)照組明顯增高，AT-Ⅲ較對(duì)照組明顯降低，且2期骨壞死動(dòng)物比1期骨壞死動(dòng)物變化明顯(P＜0.05)。 4.131I-SZ-63放免顯像：3個(gè)月時(shí)注射131I-SZ-63后2h，馬血清加激素組股骨兩端呈局限性放射性濃聚區(qū)，以股骨頭部為著；而其他實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均未見明顯異常放射性濃聚。馬血清加激素組、激素組、酒精組和對(duì)照組股骨頭/干放射性

14、攝取比值分別為2.16±0.35、1.78±0.31、1.68±0.29和1.57±0.12，馬血清實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間比較差異具有顯著性(P＜0.05)，酒精和單純激素實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間比較差異不具有顯著性(P＞0.05)。6個(gè)月時(shí)單純激素組股骨頭部也見放射性濃聚。 結(jié)論：1.酒精和單純激素都可引起明顯的肝臟損害和脂肪代謝障礙，股骨頭病變也有許多相似處，且酒精中毒可導(dǎo)致內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素增高，提示二者可能具有共同的發(fā)病機(jī)制。

15、 2.酒精所致股骨頭缺血壞死3個(gè)月時(shí)發(fā)生率為50％，第6個(gè)月時(shí)發(fā)生率為75％。 3.激素所致股骨頭缺血壞死3個(gè)月時(shí)發(fā)生率為60％，第6個(gè)月時(shí)發(fā)生率為80％。 4.馬血清加激素所致股骨頭缺血壞死3個(gè)月時(shí)發(fā)生率為80％，第6個(gè)月時(shí)發(fā)生率為100％。 5.馬血清加激素可引起較嚴(yán)重的ANFH，脂肪代謝紊亂、小血管炎和血管內(nèi)凝血病變明顯，提示脂肪代謝紊亂、微血管病變?cè)贏NFH發(fā)病機(jī)制中起著重要作用。 6.兔ANF