皮質類固醇性股骨頭壞死發(fā)病機制與早期干預研究.pdf

1、目的：應用分離純化的人股骨頭骨微血管血管內皮細胞(HLlman bonemicrovascular endothelial cell，HBMEC)在體外建立糖皮質激素損傷的細胞模型，并利用這一細胞模型篩選對激素引起HBMEC損害具有保護作用的藥物。 方法：應用UEA-1結合的磁珠分離和純化HBMEC并進行鑒定；在體外建立糖皮質激素殺傷HMEC的細胞模型模型;用MTT法、臺盼藍染色及TLINEL方法確定細胞損傷的類型．比較分析不同

2、SARS患者血清對糖皮質激素誘導的HBMEC損害的影響；應用RT-PCR、Western Blot和免疫組化方法檢測SARS-CoV相關受體ACE2及CD209L在HBMEC的表達。比較評價不同藥物PGE1、7643(丹參提取的單體)、那曲肝素、依諾肝素、丹參、川芎嗪、大蒜素等對糖皮質激素誘導的HBMEC損害的保護作用． 結果；應用UEA-1磁珠分離純化的HBMEC表現(xiàn)單層生長和接觸抑制的特性；免疫熒光染色證實這些細胞表達VWF

3、，CD31，CD34并攝取低密度脂蛋白．將HBMEC與不同劑量的糖皮質激素共同孵育，可以直接導致HBMEC損傷，并表現(xiàn)明顯的劑量和時間依賴性．這些損傷的細胞可以被臺盼藍染色而TUNEL染色陰性，表明細胞壞死是損傷主要類型．SARS患者血清單獨不對HBMEC造成損傷，但可明顯增加HBMEC對糖皮質激素的殺傷敏感性．免疫細胞化學和Western Blot證實：HBMEC表達兩種SARS病毒受體ACE2和CD209L應用糖皮質激素誘導HBME